:: دوره 5، شماره 1 - ( 1-1395 ) ::
جلد 5 شماره 1 صفحات 14-1 برگشت به فهرست نسخه ها
ایجاد گیاه سیب زمینی مقاوم به ویروس PVX با استفاده از مکانیسم RNA Silencing
شهلاسادات فاطری رضوانی ، مقصود پژوهنده* ، اکبر شیرزاد ، سکینه لطفی
گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی دانشگاه شهید مدنی آذربایجان ، pazhouhandeh@gmail.com
چکیده:   (7289 مشاهده)

یکی از عوامل اصلی کاهش محصول سیب ­زمینی ویروسها هستند. ویروس X سیب­ زمینی (Potato X Potexvirus: PVX) از مهمترین ویروسهای این گیاه می­باشد و عمده ­ترین روش مبارزه با آن استفاده از ارقام مقاوم است. در این تحقیق سعی شد با بهره ­گیری از تکنیک RNA silencing گیاهان سیب­ زمینی مقاوم به این ویروس تولید شود. برای این­کار ابتدا با دو همسانه­ سازی متوالی یک سازه سنجاق­سری برای انتهای ژن P25 ویروس PVX در ناقل pFGC5941 تحت پیشبر CaMV 35S ساخته شد. پروتئین P25 نقش ممانعت از RNA Silencing  را در میزبان ویروس به عهده دارد. ناقل نوترکیب حاصل پس از تایید، به آگروباکتریوم منتقل شده و قطعات برگ  و میانگره سیب ­زمینی رقم آگریا به­ وسیله آگروباکتریوم سویه LBA4404 تراریزش شدند. پس از کالوس­زایی، جوانه­ زنی و ریشه­ زایی، گیاهان تراریخته انتخاب و تکثیر شدند. بررسی مولکولی با PCR روی DNA گیاهان، با RT-PCR روی RNA آنها وجود تراژن و بیان شدن آن را تایید کرد. گیاهان تراریخته تکثیر شده و در گلخانه به روش مکانیکی با PVX تلقیح شدند. نتایج ELISA با آنتی بادی اختصاصی پروتئین پوششی PVX مقاومت دو لاین تراریخته را نشان داد. تایید مولکولی این دو لاین مقاوم سیب زمینی به PVX با RT-PCR روی RNA گیاهان به­ کمک آغازگرهای ژن پروتئین پوششی ویروس انجام شد. نتیجه این تحقیق منجر به تولید دو لاین مستقل سیب ­زمینی مقاوم به PVX گردید که بررسی مقاومت و این همانی آنها در شرایط مزرعه بایستی انجام پذیرد و مینی تیوبرهای آنها جهت تکثیر تولید شود.

واژه‌های کلیدی: سیب زمینی، PVX، مقاومت، تراریخته، خاموشی ژن
متن کامل [PDF 637 kb]   (4726 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مهندسی ژنتیک گیاهی
دریافت: 1394/6/14 | پذیرش: 1395/2/24 | انتشار: 1395/9/17


XML   English Abstract   Print



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 5، شماره 1 - ( 1-1395 ) برگشت به فهرست نسخه ها