گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران ، mhdsohani@gmail.com
چکیده: (5905 مشاهده)
یکی از مؤثرترین راههای ایجاد گیاهان مقاوم به علفکش گلایفوسیت، دستورزی ژن کد کننده آنزیم EPSPS به منظور کاهش میل ترکیبی گلایفوسیت به این آنزیم است. EPSPSازآنزیمهایمسیرشیکیمات بودهکهمسئولساختاسیدهایآمینه حلقوی و نیز انواع متابولیتهای ثانویه درگیاهانوباکتریهااست. بدون حضورآنزیمفوق،موجودقادربهادامهحیاتنخواهدبود.در تحقیق حاضر یکی ازدومینهای مهم جهت اتصال آنزیم EPSPS که اسیدآمینه گلایسین ۹۶ است، به روش جهشزایی نقطهای بهواسطه مگاپرایمر در تک تیوپ از واکنش PCR به اسیدآمینه آلانین تغییر داده شد. ژن تغییر یافته (EPSPS)، به همراه ژن تیپ وحشی (35S:EPSPS) جداگانه در وکتور بیانی pPZPY122کلون و به واسطه سویه سوپربیماریزای EHA105 ازAgrobacterium tumefaciens به جنین بالغ گیاه برنج (Oryza sativa L.) در رقم هاشمی به روشin planta انتقال یافتند. تأیید مولکولی تراریزش در دو نسل از گیاهان برنج به روش PCR انجام شد. همچنین تأیید فنوتیپی بر اساس مقاومت به آنتیبیوتیک جنتامایسین و نیز مقاومت به علفکش گلایفوسیت در غلظتهای مختلف انجام شد. در نهایت بررسی مقدار بیان ژنهای انتقال یافته در نسل دوم به واسطه qPCR انجام شد. نتایج نشان دهنده بیان هر دو ژن در گیاهان مورد آزمایش بود. در این مطالعه مشخص شد که فرابیان ژن موتانت سبب تولید گیاهان با مقاومت بالاتر به علفکش در مقایسه با گیاهان شاهد غیرموتانت و همچنین گیاهان با فرابیان ژن وحشی شده است.