:: دوره 7، شماره 2 - ( 10-1397 ) ::
جلد 7 شماره 2 صفحات 115-123 برگشت به فهرست نسخه ها
ارزیابی سریع پیشبرهای بذری در برگ با استفاده از فاکتور رونویسی LEC2
محمد افشار شاندیز، حسن رهنما*، حسین آذرنیوند
پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران ، hrahnama@abrii.ac.ir
چکیده:   (1442 مشاهده)
فاکتور رونویسی LEC2 یکی از فاکتورهای رونویسی است که با اتصال به توالی پیشبرهای بذری سبب بیان ژن­های پایین دستی می­شود. استفاده از این فاکتور رونویسی در کنار روش آگرواینفیلتریشن می­تواند زمان ارزیابی پیشبرهای بذری را با توجه به حذف زمان طولانی مدت انتقال دائم تا بذردهی کاهش دهد. در این تحقیق اختصاصی بودن بیان بذری ژن تحت کنترل پیشبر FAD2-1 پس از جداسازی از گیاه گلرنگ با استفاده از آنالیز بیان ژن GUS در برگهای توتون مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج توالی­یابی پیشبر FAD2-1 نشان داد که این قطعه جدا شده از بالادست ژن FAD2-1 حاوی عناصر اساسی برای بیان اختصاصی در بذر است. جهت ارزیابی سریع اختصاصی بودن بیان بذری در پیشبر ژن FAD2-1 دو کاست ژنی طراحی گردید: کاست ژنی اول pFAD2-GUS  (ژن GUS و پیشبر ژن (FAD2-1 و کاست ژنی دوم pBI-LEC2  (ژن LEC2 و پیشبر 35S). کاست­های ژنی به صورت جداگانه در وکتور pBI121 کلون شده و در نهایت به سویه EHA105 آگروباکتریوم منتقل شدند. به منظور بررسی سریع عملکرد این پیشبر، آگروباکتریوم­های حاوی دو سازه بصورت جداگانه آماده و کشت شده و پس از تنظیم غلظت هر دو کشت بر روی OD600=0.6 به نسبت مساوی با هم مخلوط و به برگهای توتون تزریق شد. با آبی شدن برگهای تزریق شده با سازه یک+سازه دو و عدم مشاهده رنگ در برگهای تزریق شده با سازه یک یا سازه دو اختصاصی بودن بیان بذری این پیشبر تایید شد. نتایج نشان داد که فاکتور رونویسی LEC2 با شناسایی توالی­های خاص در بالادست ژنهای بذری سبب بیان ژنهای پایین دستی می­شود. از اینرو این تحقیق پیشنهاد می­کند که فاکتور رونویسی LEC2 به همراه روش آگروینفیلتریشن می­تواند به عنوان ابزاری کارا و سریع در تایید قطعاتی که بالقوه به عنوان پیشبر بذری جداسازی می­شوند، استفاده شود.
 
واژه‌های کلیدی: آگرواینفیلتریشن، آنالیز پیشبر، پیشبر بذری، LEC2
متن کامل [PDF 937 kb]   (293 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مهندسی ژنتیک گیاهی
دریافت: 1397/7/30 | پذیرش: 1397/11/2 | انتشار: 1397/11/19


XML   English Abstract   Print



دوره 7، شماره 2 - ( 10-1397 ) برگشت به فهرست نسخه ها