|
شناسایی گروه غالب ویروس اس سیب زمینی (PVS) در ایران و بیان ژن پوشش پروتئینی آن
|
ناهید مسعودی   ، احمد روحی بخش* ، محمدحسن عصاره ، مسعود نادرپور ، داود کولیوند |
| گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران ، a_rouhibakhsh1966@yahoo.com |
|
|
چکیده: (4763 مشاهده) |
| بیان ژن ویروسها در باکتری برای مطالعه پروتئین ویروسها و تولید آنتیبادی اختصاصی مورد استفاده قرار میگیرد. در این پژوهش، نمونه های سیبزمینی از هشت استان ایران جمع آوری شده و ردیابی ویروس Potato virus S، به عنوان یکی از مخربترین ویروسهای سیبزمینی، بوسیله داس-الیزا و آرتی-پی سی آر انجام گرفت. تعیین گروه غالب با توجه به توالی ژن پوشش پروتئینی و پس از تجزیه فیلوژنی انجام شد. ژن کامل CP تکثیر و همسانه سازی شده و مورد توالی یابی قرار گرفت، سپس از پلاسمید pJET1.2/blunt برش داده شده و به پلاسمید بیان pET-28a (+) متصل شد و سازه (pET-28a:PVS:CP) به باکتری Escherichia coli سویه BL21 منتقل شد. بهینه سازی بیان ژن با القا بوسیله IPTG در غلظتهای 5/0، 1 و 2 mM به مدت 3، 4 و 6 ساعت انجام گرفت و توسط SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. بر اساس توالی نوکلئوتیدی، جدایههای ایرانی PVS به سه گروه تقسیم شدند که یک گروه با 22 عضو به عنوان گروه غالب شناخته شد. بیان پروتئین نوترکیب با وزن 34 کیلودالتون توسط وسترن تایید شد. القاء با غلظت 1 میلی مولار IPTG و به مدت 4 ساعت بهترین بیان را نشان داد. این نخستین گزارش بیان ژن پوشش پروتئینی ویروس PVS است که برای تهیه آنتی بادی این ویروس اهمیت دارد. |
|
| واژه‌های کلیدی: ویروس اس سیبزمینی، بیان ژن، پروتئین نوترکیب، تجزیه فیلوژنتیکی، PVS |
|
|
متن کامل [PDF 728 kb]
(1581 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: 1397/9/24 | پذیرش: 1397/11/17 | انتشار: 1397/12/6
|
|
|
|
|
|
