|
خاموشی ژن bZIP14 با استفاده از CRISPR/Cas9 و بررسی موتانت ها در پاسخ به تنش شبکه آندوپلاسمی در گیاه Marchantia polymorpha
|
آزاده محسنی   ، محمد فارسی* ، علیرضا سیفی |
| گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی، دانشگاه فردوسی مشهد ، farsi@um.ac.ir |
|
|
چکیده: (2277 مشاهده) |
| انباشته شدن پروتئین‌های تانخورده و بد-تاخورده سبب تنش شبکه آندوپلاسمی می‌شود. در پاسخ به تنش شبکه آندوپلاسمی، پاسخ به پروتئین تانخورده (UPR) توسط حس‌گرهای تراغشایی شبکه آندوپلاسمی راه‌اندازی می‌شود. این مسیر مجموعه‌ای از سیگنال‌های پیام‌رسان یکپارچه است که برای بازگرداندن پایداری شبکه آندوپلاسمی طراحی شده است. دو فاکتور رونویسی bZIP به نام‌های bZIP14 و bZIP7 مسیر UPR را در گیاه Marchantia polymorpha تنظیم می‌کنند. در این مطالعه لاین‌ّهای موتانت bzip14 با استفاده از فناوری CRISPR/Cas9 در گیاه مارکانتیا جمع‌آوری شده است. بدین منظور توالی DNA ژن bZIP14 در پایگاه اطلاعاتی Marchantia.info به کمک Blastp برای گیاه مارکانتیا شناسایی شد. بدین منظور، توالی DNAی ژن bZIP14 با انجام بلاست پروتئینی در وبگاه Marchantia.info شناسایی شد. توالی اگزون به منظور شناسایی sgRNAها در پایگاهhttp://crispor.tefor.net/ وارد و از میان sgRNAهای پیشنهادی، سه کاندید انتخاب شدند. sgRNAها درون سازه اختصاصی CRISPR/Cas9 برای گیاه مارکانتیا به نام pMpGE013 وارد و پس از انتقال به اگروباکتری سویه GWB303+pSOUP به گیاه انتقال داده شد. از گیاهان باززا شده در محیط انتخابی دارای هایگرومایسین، استخراج DNA انجام و پس از تکثیر با پرایمرهای اختصاصی، برای توالی‌یابی ارسال شد. هشت لاین از ۱۱ لاین با توالی صحیح، تغییرات نوکلئوتیدی حذف و اضافه در توالی DNA نشان دادند. یک لاین موتانت انتخاب و برای ارزیابی فنوتیپی و آزمون زنده‌مانی به محیط حاوی ترکیب تونیکامایسین، ماده شیمیایی القا کننده تنش شبکه آندوپلاسمی انتقال یافت. بررسی‌ها نشان داد که bZIP14 تنها هومولوگ ژن‌های bZIP17 و bZIP28 در گیاه آرابیدوپسیس است. همچنین تحت تنش شبکه آندوپلاسمی، گیاهان موتانت در مقایسه با گیاهان وحشی تفاوت معناداری در سطح ۵ درصد نشان داده‌اند. |
|
| واژه‌های کلیدی: پروتئین تانخورده، تنش شبکه آندوپلاسمی، مارکانتیا، bZIP14، CRISPR/Cas9 |
|
|
متن کامل [PDF 1203 kb]
(541 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
مهندسی ژنتیک گیاهی
دریافت: 1400/2/1 | پذیرش: 1400/3/7 | انتشار: 1400/3/17
|
|
|
|
|
|
