گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، ایران ، moshtaghi@um.ac.ir
چکیده: (2115 مشاهده)
نخود (Cicer arietinum) در رقابت با علفهای هرز بسیار حساس بوده و دچار کاهش عملکرد و کیفیت محصول میشود. لذا تولید گیاهان مقاوم به علفکشهای عمومی نظیر گلایفوسیت مفید میباشد. در این تحقیق، ازAgrobacterium tumefaciens سویه LBA4404 حاوی پلاسمید pBI121 و ژن موتاسیون یافته epsps برای ایجاد مقاومت به علفکش گلایفوسیت استفاده شد که در آن ژن nptII به عنوان گزینشگر تحت پیشبر 35S قرار گرفته است. بهمنظور انتقال ژن از محورهای جنینی نخود رقم ثمین و بیونیج استفاده شد. ریزنمونه ها پس از همکشتی با سوسپانسیون باکتری به مدت سه روز در محیط همکشتی B5 قرار گرفت و پس از آن بهمنظور باززایی به محیط کشت MS به همراه غلظت مناسبی از هورمونهای BAP، Kin و NAA منتقل گردید. درنهایت پس از گزینشهای متوالی با استفاده از آنتی بیوتیک کانامایسین، ریشهزایی و استقرار گیاهان T0 در محیط هیدروپونیک انجام شد و با استفاده از آزمون PCR، در 15گیاه ژن اختصاصی epsps و ژن nptII تکثیر و تراریختگی آنها تأیید شد. عدم آلودگی گیاهان مشکوک به تراریخته با استفاده از آغازگرهای نواحی ITS باکتری و همچنین با بررسی بیان ژن مورد نظر با استفاده از آزمون RT-PCR تأیید شد و درصد تراریختگی در این بررسی 75/0 درصد بود.