fa انتقال ژن آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت Bبه گیاه توتون مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong>یکی از شایع&shy;ترین آلودگی&shy;های ویروسی انسانی در سراسر جهان آلودگی ویروس هپاتیت </strong><strong><span dir="LTR">&nbsp;B</span></strong><strong>است. مؤثرترین شیوه برای کنترل و درمان این بیماری، تزریق واکسن می&shy;باشد، اما با توجه به گران بودن داروهای شیمیایی، تولید پروتئین نوترکیب ویروس هپاتیت </strong><strong><span dir="LTR">&nbsp;B</span></strong><strong> به عنوان واکسن خوراکی در گیاهان طی چند سال گذشته با بیورآکتور&shy;های مناسب برای تولید ارزان و فراوان اهمیت یافته است. بنابراین در این پژوهش سعی شده است که ژن </strong><strong><em><span dir="LTR">HBsAg</span></em></strong><strong> با کمترین هزینه به گیاه مدل توتون منتقل شود. بدین&shy;منظور ابتدا </strong><strong>ناقل دوگانه</strong><strong><span dir="LTR">pCAMBIA 1304 </span></strong><strong>&nbsp;حاوی ژن </strong><strong><em><span dir="LTR">HBsAg</span></em></strong><strong> در باکتری </strong><strong><em><span dir="LTR">Escherichia coli</span></em></strong><strong> سویه</strong><strong><span dir="LTR">JM107</span></strong><strong> و اگروباکتریوم سویه </strong><strong><span dir="LTR">LBA4404</span></strong><strong> کلون و به روش قطعات برگی به گیاه توتون منتقل شد. باززایی ریزنمونه&shy;های تلقیح شده در محیط&shy;کشت انتخابی </strong><strong><span dir="LTR">MS</span></strong><strong> حاوی 500 میلی&shy;گرم در لیتر سفوتاکسیم و 15 میلی&shy;گرم در لیتر هیگرومایسین و همچنین تنظیم&shy;کننده&shy;های</strong><strong> رشد در غلظت&shy;های یک میلی&shy;گرم در لیتر </strong><strong><span dir="LTR">&nbsp;BAP</span></strong> <strong>و یک دهم میلی&shy;گرم در لیتر </strong><strong><span dir="LTR">NAA</span></strong><strong> انجام گرفت. در آخر پس از رسیدن گیاهچه&shy;های غربال شده به ارتفاع 15 سانتیمتر، </strong><strong>به روش </strong><strong><span dir="LTR">CTAB</span></strong><strong> از </strong><strong>گیاهان تراریخته احتمالی </strong><strong><span dir="LTR">DNA</span></strong><strong> استخراج </strong><strong>شد و جهت شناسایی و تأیید حضور ژن با آغازگرهای اختصاصی واکنش </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong><strong> و جهت بررسی بیان ژن واکنش </strong><strong><span dir="LTR">RT-PCR</span></strong><strong> انجام گرفت و بدین ترتیب حضور و بیان این ژن در گیاهان تراریخته توتون تأیید شد</strong></p> <p>Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the most widespread viral infections of humans. An effective way to treat and prevent the disease is vaccination. Since production of conventional HBV vaccines is very expensive, use of transgenic plants as an alternative bioreactor has recently become of interest to many researchers. In this study, the <em>HBsAg </em>gene has been transferred to pepper plants (<em>Nicotiana tabacum</em>) through the leaf disk technique. The recombinant plant expression vector, pCAMBIA containing <em>HBsAg</em> was cloned into <em>E. coli </em>strain JM107 and was then introduced into <em>Agrobacterium tumefaciens </em>strain LBA4404. Young tobacco leaves were used as explants and co-cultivated with <em>A. tumefaciens. </em>The transformants were regenerated on selection medium containing 1mg.l^-1BAP, 0/1mg.l^-1 NAA, 500 mg.l^-1 cephotaxim and 15 mg.l^-1 hygromycin. After the growth of plantlets (about 15 cm), genomic DNA was extracted from putatively regenerated plants by the CTAB method. The presence of <em>HBsAg </em>gene in transgenic plants was detected using PCR analysis. Finally expression of <em>HBsAg </em>gene was tested via RT-PCR analysis.</p> اگروباکتریوم, ترانفورماسیون, توتون تراریخت, ژن HBsAg, واکسن خوراکی Agrobacterium, Edible Vaccine, Gene Transformation, HBsAg Gene, Transgenic Tobacco 23 30 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-146-1&slc_lang=fa&sid=1 Majedeh Neisi ماجده نیسی 10031947532846001524 10031947532846001524 No Dept. of Agricultural Biotechnology, Faculty of Agriculture, Isfahan Univ. of Technology گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی دانشگاه صنعتی اصفهان Badraldin Ebrahim Sayed Tabatabae بدرالدین ابراهیم سید طباطبایی sayedt@cc.iut.ac.ir 10031947532846001525 10031947532846001525 Yes Dept. of Agricultural Biotechnology, Faculty of Agriculture, Isfahan Univ. of Technology گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی دانشگاه صنعتی اصفهان Cyrus Ghobadi سیروس قبادی cyrus@cc.iut.ac.ir 10031947532846001526 10031947532846001526 No Dept. of Horticultural Sciences, Faculty of Agriculture, Isfahan Univ. of Technology گروه علوم باغبانی، دانشکده کشاورزی دانشگاه صنعتی اصفهان Hamid Rajabi Memari حمید رجبی معماری 10031947532846001527 10031947532846001527 No Dept. of Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Shahid Chamran University گروه اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی دانشگاه شهید چمران اهواز Ghazale Khaksar غزاله خاکسار 10031947532846001528 10031947532846001528 No Dept. of Horticultural Sciences, Faculty of Agriculture, Isfahan Univ. of Technology گروه علوم باغبانی، دانشکده کشاورزی دانشگاه صنعتی اصفهان