fa بیان ژن بتا (1-3)(1-4)گلوکاناز درباکتری Lactococcus lactis با هدف تولید غذای پروبیوتیک دام مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها Microrganisms and Viruses پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b zar;">پروبیوتیک‌ها میکروارگانیسم‌های غیربیماریزا و بی‌ضرری هستند که در روده انسان و حیوانات وجود دارند. این میکروارگانیسم‌ها نه‌تنها ایجاد بیماری نمی‌کنند، بلکه اثرات بسیار مطلوبی بر عملکرد و سلامت دام و طیور دارند.</span></strong> <span style="font-size:14px;"><em><span dir="LTR">Lactococcus lactis</span></em></span> <strong><span style="font-family:b zar;">&nbsp;گونه‌ای از این باکتری‌ها</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> است که به عنوان کاندیدی برای تولید پروتئین‌های مفید بیولوژیکی </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">انتخاب شده است. آنزیم‌ لیکیناز، نوعی بتاگلوکاناز است که بتا (1-3) (1-4)گلوکان‌ها (لیکینان‌ها) را هیدرولیز می‌کند. لیکینان‌ها ترکیبات پلی‌ساکاریدی در دیواره‌ سلول‌های گیاهان عالی خانواده پواسه هستند که ظاهرا منحصر به دیواره سلولی اندوسپرم گرامینه‌ها همچون جو، چاودار، سورگوم، برنج و گندم می‌باشند. هدف از این مطالعه بیان ژن لیکیناز در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس و تولید ترشحی این آنزیم به منظور دستیابی به مکمل غذایی برای طیور است که توانایی تجزیه بتاگلوکان جو را برای دستگاه گوارش طیور ایجاد کند. این امر امکان جایگزینی جو بجای ذرت در جیره غذایی طیور را فراهم می‌سازد. برای دستیابی به این منظور ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">licBM2</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> کد کننده‌ی آنزیم بتا (1-3) (1-4) گلوکاناز به همراه سیگنال پپتید ترشحی و هضم آنزیمی در پلاسمید </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pNZ8149</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> کلون گردید.&nbsp; انتقال پلاسمید نوترکیب به باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس با روش الکتروپوریشن صورت گرفته و&nbsp; غربالگری کلنی‌های ترانسفرم شده توسط توانایی رشد باکتری بر محیط انتخابی لاکتوز انجام شد.</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> القای بیان ژن بوسیله‌ی القاگر نیسین صورت گرفت و بررسی میزان بیان ژن با اندازه‌گیری فعالیت آنزیمی پروتئین نوترکیب مطالعه شد. با افزایش زمان القاء بیان ژن و میزان آنزیم تولید شده و فعالیت حاصل از آن افزایش می‌یابد. دستاورد این مطالعه کلون سازی و بیان موفق ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">licBM2</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> در باکتری گرم مثبت لاکتوکوکوس لاکتیس و تولید پروبیوتیک با پروتئین نوترکیب می‌باشد.</span></strong> <p style="margin-left:25.2pt;">Probiotics are bacteria with beneficial effects to humans and animals. Gram-positive Lactococcus lactis can be genetically engineered to efficiently produce a large variety of proteins. Glucanase enzymes, are capable to hydrolyze &beta;-glucans (a non-starch polysaccharide). &beta;(1,3)-(1,4) glucan (Lechinan) is a characteristic hemicellulose in primary cell walls of grasses such as barley, rye, sorghum, rice and wheat. The purpose of this study is to express the lechinase enzyme in <em>Lactococcus lactis</em> to achieve a feed supplement for hydrolyzation of barley &beta;-glucan to replace corn by barley in poultry diets. licBM2 gene encoding lechinas enzyme with a secretion signal peptide was cloned in pNZ8149 plasmid. Then recombinant plasmids were transferred to <em>Lactococcus lactis</em> using electroporation method and the transformed colonies were selected via their ability to grow on lactose containing medium. The expression of transgene was induced using of Nisin in the medium.&nbsp; Our results showed that by increasing of the induction time, the expression of lechinase gene and consequently the production of enzyme in the medium were increased.<br> &nbsp;</p> بتاگلوکاناز, پروبیوتیک , تغذیه طیور, لاکتوکوکوس لاکتیس Lactococcus lactis, probiotic, β-glucanase, Poultry Nutrition 213 221 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-164-1&slc_lang=fa&sid=1 Marzieh Mohamadkhani مرضیه محمدخانی mrz.mohamadkhani@gmail.com 10031947532846001973 10031947532846001973 No Department of Plant Breeding & biotechnology, Shahrekord University گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشگاه شهرکرد Neda Mirakhorli ندا میرآخورلی nedamirakhorli@yahoo.com 10031947532846001974 10031947532846001974 Yes Department of Plant Breeding & biotechnology, Shahrekord University گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشگاه شهرکرد Rahman Emamzadeh رحمان امامزاده 10031947532846001975 10031947532846001975 No Department of Biology, Faculty of Sience, Isfahan University گروه زیست شناسی، بیوشیمی، دانشگاه اصفهان fariborz Khajali فریبرز خواجعلی khajali@gmail.com 10031947532846001976 10031947532846001976 No Department of Poultry Nutrition of Shahrekord University. Iran گروه علوم دام، تغذیه طیور، دانشگاه شهرکرد