Genetic Engineering and Biosafety Journal

fa ایجاد گیاه سیب زمینی مقاوم به ویروس PVX با استفاده از مکانیسم RNA Silencing Production of Potato Resistant Plant to PVX using an RNA Silencing Mechanism مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research یکی از عوامل اصلی کاهش محصول سیب زمینی ویروسها هستند. ویروس X سیب زمینی (Potato X Potexvirus: PVX) از مهمترین ویروسهای این گیاه میباشد و عمده ترین روش مبارزه با آن استفاده از ارقام مقاوم است. در این تحقیق سعی شد با بهره گیری از تکنیک RNA silencing گیاهان سیب زمینی مقاوم به این ویروس تولید شود. برای اینکار ابتدا با دو همسانه سازی متوالی یک سازه سنجاقسری برای انتهای ژن P25 ویروس PVX در ناقل pFGC5941 تحت پیشبر CaMV 35S ساخته شد. پروتئین P25 نقش ممانعت از RNA Silencing  را در میزبان ویروس به عهده دارد. ناقل نوترکیب حاصل پس از تایید، به آگروباکتریوم منتقل شده و قطعات برگ  و میانگره سیب زمینی رقم آگریا به وسیله آگروباکتریوم سویه LBA4404 تراریزش شدند. پس از کالوسزایی، جوانه زنی و ریشه زایی، گیاهان تراریخته انتخاب و تکثیر شدند. بررسی مولکولی با PCR روی DNA گیاهان، با RT-PCR روی RNA آنها وجود تراژن و بیان شدن آن را تایید کرد. گیاهان تراریخته تکثیر شده و در گلخانه به روش مکانیکی با PVX تلقیح شدند. نتایج ELISA با آنتی بادی اختصاصی پروتئین پوششی PVX مقاومت دو لاین تراریخته را نشان داد. تایید مولکولی این دو لاین مقاوم سیب زمینی به PVX با RT-PCR روی RNA گیاهان به کمک آغازگرهای ژن پروتئین پوششی ویروس انجام شد. نتیجه این تحقیق منجر به تولید دو لاین مستقل سیب زمینی مقاوم به PVX گردید که بررسی مقاومت و این همانی آنها در شرایط مزرعه بایستی انجام پذیرد و مینی تیوبرهای آنها جهت تکثیر تولید شود. Viruses are the main causes of potato yield loss. Potato X Potexvirus (PVX) is one of the most important potato viruses and the use of resistant varieties is the principal way to control it. In this study, we tried to produce potato plants resistant to this virus using an RNA silencing technique. To this end, a hairpin construct of P25 of PVX was made in pFGC5941 under control of the CaMV 35S promoter with two consecutive cloning steps. The P25 protein is a suppressor of RNA Silencing in viral host plants. The recombinant vector was transferred into Agrobacterium tumefaciens LBA4404 strain. Leaf and internode pieces of potato (Agria variety) were transformed by Agrobacterium. Following induction of callus, shoot and root, regenerated transgenic plants were selected and micro-propagated. Molecular analysis by PCR on DNA of plants and by RT-PCR on their RNA confirmed the presence and the expression of the transgene. Transgenic plants were propagated and then inoculated mechanically by PVX in the greenhouse. ELISA results using PVX-coat protein antibody showed resistance of two transgenic lines to PVX. Molecular confirmation of these potato lines was performed using PVX coat protein primers by RT-PCR on plant RNAs. The results of this research have led to the production of two independent lines of potato that are resistant to PVX and future work will involve analysis of resistance in field conditions and the production of their mini-tuber. سیب زمینی, PVX , مقاومت, تراریخته, خاموشی ژن Potato, PVX, Resistance, Transgenic Plant, RNA Silencing 1 14 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-104-5&slc_lang=fa&sid=1 ShahlaSadat Fateri Rezvani شهلاسادات فاطری رضوانی 10031947532846001517 10031947532846001517 No Biotechnology Dept. Azarbaijan Shahid Madani University گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی دانشگاه شهید مدنی آذربایجان Maghsoud Pazhouhandeh مقصود پژوهنده pazhouhandeh@gmail.com 10031947532846001518 10031947532846001518 Yes Biotechnology Dept. Azarbaijan Shahid Madani University گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی دانشگاه شهید مدنی آذربایجان Akbar Shirzad اکبر شیرزاد 10031947532846001519 10031947532846001519 No Dept. Azarbaijan Shahid Madani University دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران Sakineh Lotfi سکینه لطفی 10031947532846001520 10031947532846001520 No Agriculture Faculty, Azarbaijan Shahid Madani University, Km 35 Tabriz-Azarshahr Road, Iran. دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران