fa بررسی ساختار جایگاه تراژن cry1Ab در برنج تراریخته طارم مولایی مهندسی ژنتیک جانوری Animal پژوهشي Research <p><strong><span dir="RTL">میزان بیان تراژن و پایداری آن تحت تأثیر عواملی مثل ساختار کاست بیانی، الگوی تلفیق و ساختار جایگاه تراژن قرار می&shy;گیرد. ساختار جایگاه تراژن در سازوکارهای بیان آن اهمیت دارد. در این بررسی سعی شده است با جداسازی ردیف مجاور محل تلفیق تراژن </span><em>cry1Ab</em><span dir="RTL"> در برنج تراریخته طارم مولایی، ساختار جایگاه آن مشخص شود. برنج تراریخته طارم مولایی که از تراریزش همزمان دو پلاسمید </span>pCIB4421<span dir="RTL"> و </span>pChitIHygII<span dir="RTL"> تولید شده دارای الگوی تلفیق ساده با بیان پایدار طی چندین نسل است. جهت بررسی ساختار جایگاه تراژن،&nbsp; </span><span dir="RTL">ابتدا با استفاده از آغازگرهای طراحی شده از انتهای </span><span dir="RTL">&acute;</span><span dir="RTL">3 و </span><span dir="RTL">&acute;</span><span dir="RTL">5 ژن مقاومت به </span><span dir="RTL">امپی‌سیلین</span><span dir="RTL">، انتهای </span><span dir="RTL">&acute;</span><span dir="RTL">3 ژن </span><em>cry1Ab</em><span dir="RTL"> و انتهای </span><span dir="RTL">&acute;</span><span dir="RTL">5 پیشبر </span>PEPC<span dir="RTL"> بر روی پلاسمید </span>pCIB4421<span dir="RTL"> و انجام پی.سی.آر، حدود محل شکست پلاسمید تعیین شد. سپس با توجه به محل احتمالی شکست برای جداسازی نواحی مجاور آن از دو راهبرد پی.سی.آر یکطرفه شامل </span>TAIL-PCR<span dir="RTL"> و </span>Splinkerette PCR<span dir="RTL"> استفاده شد. ردیف‌یابی قطعات تکثیر شده و بررسی‌های بیوانفورماتیک نشان داد که محل شکست در نسخه‌ی کامل 148 نوکلئوتید بعد از انتهای </span>&acute;<span dir="RTL">3 ژن مقاومت به امپی‌سیلین است و 1496 نوکلئوتید از نواحی پایین دست محل شکست و 311 نوکلئوتید از نواحی بالا دست جداسازی شد. نتایج همردیف سازی این توالی‌ها با توالی پلاسمیدهای </span>pCIB4421<span dir="RTL"> و </span>pChitIHygII<span dir="RTL"> و ژنوم برنج در پایگاه </span>NCBI<span dir="RTL"> نشان داد که توالی پایین دست مخلوطی از قطعات پلاسمید و ژنوم برنج و توالی بالا دست نیز قطعات ناپیوسته‌ای از توالی پلاسمیدهای منتقل شده است</span></strong></p> <p>the level and stability of transgene expression can be influenced by factors such as structure of expression cassette, integration pattern and locus structure. The structure of transgene locus is important in its expression mechanisms. The aim of this experiment was to characterize the <em>cry1Ab</em> transgene locus structure in a transgenic rice (<em>Oryza</em> <em>sativa</em>, cultivar Tarom Molaii). This transgenic rice, co-transformed with two different plasmids (pCIB4421 and pChitIHygII), had a simple integration pattern and stable expression over several generations. In order to characterize the <em>cry1Ab</em> transgene locus stracture, the exact insertion site was identified using specific primers corresponding to 3&acute; and 5&acute; ends of <em>amp</em>R gene, 3&acute; end of <em>cry1Ab</em> gene and 5&acute; end of PEPC promoter on pCIB4421 plasmid. Then, DNA sequences of the flanking insertion sites were amplified using two methods of one-side PCR including TAIL-PCR and Splinkerette PCR. Sequencing of the PCR products and bioinformatics analysis revealed that pCIB4421 plasmid break for insertion was 148 bp after 3&acute; end of <em>ampR</em> gene. A fragment corresponding to 1499bp downstream sequences and 311 bp upstream of insertion site were isolated. BLAST search was performed against the pCIB4421, the pChitIHygII and <em>Oryza sativa</em> genome. Downstream sequences of the insertion site was scrambled fragments of delivered DNA and rice genome, however the upstream of the insertion site was <a href="http://www.google.com/search?hl=en&noj=1&sa=X&ei=dwpOUOCSCcjb4QT7toCIBg&ved=0CBwQvwUoAQ&q=noncontinuous&spell=1&biw=1348&bih=606">non-continuous</a> fragments of the delivered DNA.</p> ردیف مجاور تراژن ایمنی زیستی برنج تراریخته cry1Ab Biosafety, cry1Ab transgene, Flanking sequence of transgene, Transgenic rice 55 66 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-88-5&slc_lang=fa&sid=1 Hajar Yahyaiipour هاجر یحیایی پور 10031947532846003139 10031947532846003139 No University of Tehran دانشگاه تهران Behzad Garayazi بهزاد قره یاضی ghareyazie@yahoo.com 10031947532846003140 10031947532846003140 Yes Agricultural Research Education and Extension Organization (AREO), Karaj, Iran. پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی سازمان تحقیقات،آموزش و ترویج کشاورزی، کرج،ایران Ahmad Sadat noori احمد سادات نوری 10031947532846003141 10031947532846003141 No University of Tehran دانشگاه تهران Ali Izadi Darbandi علی ایزدی دربندی 10031947532846003142 10031947532846003142 No University of Tehran دانشگاه تهران Gorban Ali Nematzadeh قربانعلی نعمت زاده 10031947532846003143 10031947532846003143 No Genetics and Agricultural Biotechnology Institute of Tabarestan, Sari Agricultural Sciences and Natural Resources University. دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری