fa بهینه‌سازی عوامل مؤثر بر انتقال ژن بتا-گلوکورونیداز(GUS) به‌واسطه اگروباکتریوم در گیاه دارویی زنیان (Trachyspermum ammi) مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b zar;">زنیان یکی از مهم‌ترین گیاهان دارویی ایران است. این گیاه حاوی خاصیت‌های دارویی بسیار مهمی</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">از جمله ضد اختلالات گوارشی، ضد اسپاسم و تسکین دردهای روماتیسمی است. به‌منظور فرابیان بعضی از مواد </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">مؤثر</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">ه در این گیاه لازم است فرآیند انتقال ژن در آن بهینه شود. بدین‌منظور ریزنمونه هیپوکوتیل، دو سویه </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Agrobacterium tomefaciens</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به همراه فاکتورهای اندازه‌گیری شامل مدت زمان تلقیح (5، 10، 15، 20 دقیقه) و طول دوره هم‌کشتی (1، 2 و 3 روز) بررسی شدند. در این تحقیق از وکتور </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pBI121</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> حاوی ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GUS</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به‌عنوان گزارشگر و ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">nptII</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به‌عنوان نشانگر گیاهی استفاده شد. به منظور </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">تأیید </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">انتقال ژن از واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">)، آزمون هسیتو‌شیمیایی </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GUS</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">RT-PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> استفاده شد. بر طبق نتایج حاصل، زمان تلقیح 5 دقیقه و طول هم‌کشتی یک روز منجر به افزایش کارآیی انتقال ژن شد. ضمن اینکه سویه </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LBA4404</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> کارآیی بالاتری نسبت به </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GV3101</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> برای انتقال ژن از خود نشان داد. برای نخستین بار، مطالعه حاضر روش </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">مؤثر </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">و کارآیی را برای انتقال ژن به گیاه دارویی زنیان ارائه می‌دهد که می‌تواند به‌عنوان یک روش کارآ در انتقال ژن مورد استفاده قرار گیرد.&nbsp; </span></strong><br> &nbsp; <em>Trachyspermum ammi</em> is one of the most important medicinal herbs in Iran. This plant contains important medicinal properties, including anti-digestive, antispasmodic and relieving rheumatic pains and has been used as a spice and food preservative. To overexpress some effective ingredients in this plant, it is necessary to optimize the gene transfer process. For this purpose, the explants of hypocotyl, two strains of <em>Agrobacterium tumefaciens</em> were studied along with factors such an inoculation times (5, 10, 15, 20 min) co-cultivation times (1, 2 and 3 days). In this study, pBI121 vector harboring <em>GUS</em> as the reporter gene, and <em>nptII</em> gene as the plant selected marker were used. To confirm the gene transfer, PCR, histochemical <em>GUS</em> staining and RT-PCR tests were used. According to the results, the time of inoculation of 5 minute and the time of one day for co- cultivation increased the efficiency of gene transfer. Both bacterial strains showed a relatively good performance in gene transfer, but the LBA4404 strain showed higher efficacy than GV3101. In this study, 25 mg/L of kanamycin was selected as the appropriate concentration for determining the probable transgenic plant by Agrobacterium. For the first time, the present study presents an effective and efficient method for gene transfer to <em>Trachyspermu ammi </em>that can be effectively used for gene transfer. اگروباکتریوم, هیپوکوتیل, ژن گزارشگر, زنیان, هم کشتی, Agrobacterium, Hypocotyl, Reporter gene, Trachyspermum, Co-cultivation 269 279 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-249-2&slc_lang=fa&sid=1 Masoumeh Nomani معصومه نعمانی m_nomani@ut.ac.ir 10031947532846001961 10031947532846001961 No Department of Agronomy and Plant breeding, College of Aburaihan, University of Tehran, Tehran, Iran دانشگاه تهران Seyed Ahmad Sadat Noori سید احمد سادات نوری noori@ut.ac.ir 10031947532846001962 10031947532846001962 Yes Department of Agronomy and Plant breeding, College of Aburaihan, University of Tehran, Tehran, Iran گروه علوم زراعی و اصلاح نباتات، پردیس ابوریحان، دانشگاه تهران Masoud Tohidfar مسعود توحیدفر m_tohidfar@sbu.ac.ir 10031947532846001963 10031947532846001963 No Department of Biotechnology – College of Life Science and Biotechnology - Shahid Beheshti University, Tehran, Iran گروه بیوتکنولوژی، دانشکده مهندسی انرژی و فناوری های نوین، دانشگاه شهید بهشتی، تهران، ایران حسین رامشینی ramshini_h@ut.ac.ir 10031947532846001964 10031947532846001964 No Department of Agronomy and Plant breeding, College of Aburaihan, University of Tehran, Tehran, Iran گروه علوم زراعی و اصلاح نباتات، پردیس ابوریحان، دانشگاه تهران، ایران