fa پاسخ کلزای تراریخته با ژن aroA نسبت به تیمار گلایفوسیت مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">کلزا یکی از با اهمیت&shy; ترین دانه&shy; های روغنی جهان به شمار می&shy;رود. علف‌های هرز یکی از مهمترین عوامل تهدید کننده&shy; کشت کلزا (<em>Brassica napus</em>) است. گلایفوسیت علف‌کشی عمومی، <a name="OLE_LINK12">آنزیم </a></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">EPSPS</span></span></span> <a name="OLE_LINK6"></a><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">را مهار می&shy;کند.</span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> یکی از موثر&shy;ترین راه&shy;های ایجاد گیاهان مقاوم به گلایفوسیت، انتقال ژن کد کننده آنزیم </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">EPSPS</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> است. در پژوهش حاضر، یک جهش سه نقطه&shy; ای در ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">aroA</span></span></span></em> <span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">باکتری </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli</span></span></span></em> <span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">ایجاد کرده سپس ژن مورد نظر را به همراه یک نسخه ژن معمولی در پلاسمیدهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pUC18</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pBI121</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> کلون کرده و توسط باکتری خاکزی </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">Agrobacterium tumefaciense</span></span></span></em><em><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">،</span></span></em><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> سویه </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">LBA4404</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">، به سلول‌&shy;های گیاه کلزا <a name="OLE_LINK8"></a><a name="OLE_LINK4">رقم بهاره </a></span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RGS003</span></span></span> <span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">انتقال داده شد. ژن مورد نظر تحت کنترل پروموتور </span></span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">CaMV35S</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">و ترمیناتور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">NOS</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> بود. کلون سازی ژن در ناقل‌های کلونی و بیانی، بررسی تراریختی از طریق </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> و سایر آزمایش‌های مولکولی جهت تائید انجام گرفت. در این تحقیق در نسل </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">T1</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> از 142 لاین مستقل تراریخته برای تیمار گلایفوست استفاده گردید که از این تعداد 10 لاین برای آزمونهای بعدی در نسل </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">T₂</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> مورد استفاده گردید. بذور گیاهان تراریخته نسل </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">T₂</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> در دو شرایط </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">in vivo</span></span></span></em><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span>&nbsp;<em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">in vitro</span></span></span></em><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">به صورت آزمایش فاکتوریل در غلظت&shy;های مختلف علفکش گلایفوسیت مورد بررسی قرار گرفتند. سپس درصد سوختگی و برخی صفات مرفولوژیک مانند ارتفاع بوته، تعداد شاخه&shy;ی فرعی و تعداد غلاف در بوته اندازگیری شد. نتایج نشان داد که گیاهان تراریخته می&shy;‌توانند تا غلظت 8/76 میلی مولار از علفکش گلایفوسیت را تحمل کنند؛ در حالی که گیاه شاهد در غلظت&shy;های صفر، 2/1، 4/2 میلی مولار قدرت زنده‌مانی دارند.</span></span><br> &nbsp; Rapeseed (<em>Brassica napus</em>) is one of the most important oil seed crops in the world. The weeds are the most important threats to cultivating this plant. Glyphosate is a general herbicide that inhibit the EPSPS enzyme. One of the most effective methods to make glyphosate herbicide resistance is the transformation of the EPSPS enzyme-encoding gene. In the present study, a 3-point mutation in the <em>E. coli</em> <em>aro</em>A gene was created and then this gene with a wild-type gene was cloned in the pUC18 and pBI121 plasmids and transformed to the RGS003 spring straw cultivar of rapeseed by the <em>Agrobacterium tumefaciense</em> strain LBA4404 strain. The gene was expressed with the CaMV35S promoter and NOS terminator. Gene cloning in cloning and expression vectors, plant transformation confirmation through PCR and other molecular tests were carried out. In this research, 142 independent T1 transgenic lines were screened for glyphosate treatment and then 10 lines were selected for later tests in the T2 generation. Seeds of transgenic T2 generation under <em>in vivo</em> and <em>in vitro</em> conditions were studied in a factorial experiment in different concentrations of glyphosate herbicide. The percentage of burn and some morphological traits such as plant height, number of branches, number of pods per sub-branch, number of pods per main branch and number of pods per plant were measured. The results showed that transgenic plants can tolerate glyphosate herbicide up to 76.8 mM, while the control plant has a lifetime of 0, 1.2, 2.4 mM.<br> &nbsp; کلزا, گلایفوسیت, EPSPS, مقاومت به علفکش, صفات مرفولوژیک Rapeseed, Glyphosate, EPSPS, Herbicide resistance, Morphologic traits 41 52 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-274-2&slc_lang=fa&sid=1 Marzieh Saadati Jebeli مرضیه سعادتی جبلی marzieh.saadati@yahoo.com 10031947532846002182 10031947532846002182 No Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Razi University, Kermanshah, Iran گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران Danial Kahrizi دانیال کهریزی dkahrizi@yahoo.com 10031947532846002183 10031947532846002183 Yes Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Razi University, Kermanshah, Iran گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران Iraj Nosratti ایرج نصرتی irajnosratti@gmail.com 10031947532846002184 10031947532846002184 No Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Razi University, Kermanshah, Iran گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران