fa واکنش گیاهان تراریخته برنج حاوی ژن EPSPS به علف‌کش گلایفوسیت مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <p dir="RTL" style="margin: 0px 0px 10.66px; text-align: justify; line-height: 150%; unicode-bidi: embed; direction: rtl;"><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">یکی از مؤثرترین راه‌های ایجاد گیاهان مقاوم به علفکش گلایفوسیت، دستورزی ژن کد کننده آنزیم </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">EPSPS</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> به منظور کاهش میل ترکیبی گلایفوسیت به این آنزیم است. </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">EPSPS</span></span></span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">از</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">آنزیم‌های</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">مسیر</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">شیکیمات بوده</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">که</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">مسئول</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">ساخت</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">اسیدهای</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">آمینه حلقوی </span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">و نیز انواع متابولیت‌های ثانویه </span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">در</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">گیاهان</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">و</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">باکتری‌ها</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">است</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">. </span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">بدون حضور</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">آنزیم</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">فوق،</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">موجود</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">قادر</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">به</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">ادامه</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">حیات</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">نخواهد</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">بود</span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">.</span></span></strong> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">در تحقیق حاضر یکی ازدومین‌های مهم جهت اتصال آنزیم </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">EPSPS</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> که اسیدآمینه گلایسین ۹۶ است، به روش جهش‌زایی نقطه‌ای به‌واسطه مگاپرایمر در تک تیوپ از واکنش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">PCR</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> به اسیدآمینه آلانین تغییر داده شد. ژن تغییر یافته (</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">EPSPS</span></span></span></em></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">)، به همراه ژن تیپ وحشی (</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">35S:EPSPS</span></span></span></em></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">) جداگانه در وکتور بیانی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">pPZPY122</span></span></span></strong> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">کلون و به واسطه سویه سوپربیماریزای </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">EHA105</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> از</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">Agrobacterium tumefaciens</span></span></span></em></strong> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">&nbsp;به جنین بالغ گیاه برنج </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman bold,serif;"><span style="font-size:11.0pt;">(<em>Oryza sativa </em>L.)</span></span></span></strong> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">&nbsp;در رقم هاشمی به روش</span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">in planta </span></span></span></em></strong>&nbsp;<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">انتقال یافتند. تأیید مولکولی تراریزش در دو نسل از گیاهان برنج به روش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">PCR</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> انجام شد. همچنین تأیید فنوتیپی بر اساس مقاومت به آنتی‌بیوتیک جنتامایسین و نیز مقاومت به علفکش گلایفوسیت در غلظت‌های مختلف انجام شد. در نهایت بررسی مقدار بیان ژن‌های انتقال یافته در نسل دوم به واسطه </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;">&nbsp;qPCR</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> انجام شد. نتایج نشان دهنده بیان هر دو ژن در گیاهان مورد آزمایش بود. در این مطالعه مشخص شد که فرابیان ژن موتانت سبب تولید گیاهان با مقاومت بالاتر به علفکش در مقایسه با گیاهان شاهد غیرموتانت و همچنین گیاهان با فرابیان ژن وحشی شده است. </span></span></strong><br> &nbsp;</p> <p style="margin: 0px 0px 10.66px; text-align: justify; line-height: 150%;">The most effective way to produce a plant resistant to glyphosate is manipulation of EPSPS enzyme in order to reduce its affinity to this herbicide. It is one of the vital enzymes in the shikimate pathway, which is responsible for producing aromatic amino acids and various secondary metabolites in plants and bacteria. Without an active enzyme, the organism will not be able to survive. In the present study, one of the important domains in the EPSPS enzyme was modified by site-directed mutagenesis using mega-primer method and one tube approach. Glycine in position 96 was modified to Alanine which was sub-cloned along with the wild-type gene into pPZPY122 plant binary vector. Hashemi cultivar of rice (<em>Oryza sativa</em>) was used for transformation using EHA105 strain of <em>Agrobacterium tumefaciens</em> by <em>in planta</em> method. T₂ transgenic plants separately were evaluated to resistance to the gentamicin and glyphosate. Also, positive gene expression was confirmed by Quantitative PCR. Therefore, based on the results, these plants showed significantly a high degree of resistance to the herbicide.<br> &nbsp;</p> بیان ژن, علفکش, گلایفوسیت, تراریزش, in planta, برنج Gene expression, rice, Glyphosate, In planta, Transformation 65 78 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-283-1&slc_lang=fa&sid=1 Sedigheh Nasr Ramzi صدیقه نصررمزی kiananasreramzi@yahoo.com 10031947532846002188 10031947532846002188 No Plant Biotechnology Department, Faculty of Agricultural Sciences, University of Guilan, Rasht, Iran گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Mohammad Mahdi Sohani محمد مهدی سوهانی mhdsohani@gmail.com 10031947532846002189 10031947532846002189 Yes Plant Biotechnology Department, Faculty of Agricultural Sciences, University of Guilan, Rasht, Iran گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Reza Shirzadian Khorramabad رضا شیرزادیان خرم آباد R.shirzadian@gmail.com 10031947532846002190 10031947532846002190 No Plant Biotechnology Department, Faculty of Agricultural Sciences, University of Guilan, Rasht, Iran دانشگاه گیلان، رشت، ایران Mahyar Amininasab مهیار امینی نسب kiana.ramsey@gmail.com 10031947532846002191 10031947532846002191 No Tehran university دانشگاه تهران Jafar Asghari جعفر اصغری kiananasreramzi@yahoo.com 10031947532846002192 10031947532846002192 No Guilan university دانشگاه گیلان