fa استفاده از تکنیک PCR کمی برای کمیت سنجی Fusarium solani f.sp. phaseoli در لوبیا سفید حساس و مقاوم مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها Microrganisms and Viruses پژوهشي Research <span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">بیماری پوسیدگی فوزاریومی ریشه لوبیا توسط بیمارگر خاکزی </span></span><em><span dir="LTR">&nbsp;</span></em><span dir="LTR">f.sp<em>. phaseoli</em></span><em><span dir="LTR">Fusarium solani</span></em><span b="" style="font-family: "><span style="font-size: 12pt;">&nbsp;</span></span><em><span dir="LTR">&nbsp;</span></em><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">ایجاد می&shy;شود و خسارت فراوان در مزارع لوبیا دنیا و ایران ایجاد می&shy;کند. در حال حاضر مهمترین و اقتصادی&shy; ترین روش کنترل این بیماری استفاده از ارقام مقاوم می&shy;باشد. برای این منظور در این تحقیق عکس &shy;العمل پنج رقم رایج کشت و 14 لاین لوبیا سفید به قارچ عامل بیماری پوسیدگی فوزاریومی ریشه لوبیا ابتدا به صورت ارزیابی مورفولوژیک و سپس کمیت&shy;سنجی با</span></span><span dir="LTR">Real time PCR </span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;انجام شد. بر اساس نتایج ارزیابی مورفولوژیک لاین </span></span><span dir="LTR">KBC43106</span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> و رقم درسا به ترتیب حساس و متحمل شناخته شدند، سپس به منظور ارزیابی کمی و روند رشد قارچ عامل بیماری در لاین حساس و رقم متحمل گیاهچه &shy;های دو برگچه&shy;ای با غلظت 10⁷ اسپور در میلی&shy;لیتر قارچ عامل بیماری به روش فرو بردن ریشه (</span></span><span dir="LTR">Root dip</span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">) تلقیح گردیدند و در فواصل زمانی صفر،2 ، 7، 15، 21 و 30 روز پس از آلودگی از ریشه گیاهچه&shy; های تلقیح شده و شاهد نمونه &shy;برداری و استخراج </span></span><span dir="LTR">DNA</span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> از آنها انجام شد.<span style="color:black;"> روند افزایش تدریجی میزان </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;">DNA</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> قارچ موجود در ریشه&shy; ها با استفاده از</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">تکنیک </span></span></span><span dir="LTR">Real time PCR </span>&nbsp;<span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">و به کارگیری </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">سیستم </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;">SYBR Green</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">همراه با آغازگرهای اختصاصی برای ژن </span></span></span><span dir="LTR">elongation factor 1-&alpha;</span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">کمیت&shy;سنجی گردید</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">.</span></span></span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> نتایج نشان داد تفاوت معنی &shy;داری بین مقدار </span></span><span dir="LTR">DNA</span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;"> بیمارگر در ریشه گیاهان حساس و متحمل وجود دارد و بنابراین تکنیک </span></span><span dir="LTR">Real time PCR </span><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:12.0pt;">، تکنیک مناسبی برای ارزیابی مقاومت ارقام و لاین&shy;های لوبیا می&shy;باشد.</span></span> Bean root rot caused by soil pathogenic fungus, <em>F.solani </em>f.sp<em>. phaseoli</em><em>, </em>is considered as one of the most important diseases of bean in the world and in Iran. At the moment use of resistant cultivars is the most effective method of control. For this reason, the response of five cultivars and 14 lines of white beans were evaluated to Fusarium root rot. Firstly, a morphological evaluation of disease symptoms and then real time PCR quantification were performed. Based on the results of morphological evaluation the KBC43106 line and cultivar Dorsa, were found to be sensitive and tolerant, respectively. For quantitative assessment and growth trend of the pathogen in sensitive and tolerant genotypes, the bean seedlings were inoculated by 10⁷ suspension of relevant pathogen with root dip method, then DNA was extracted from root of inoculated and control seedlings at regular sampling intervals. The gradual increase in the amount of fungal DNA of roots was quantified by Real time PCR technique and utilizing of SYBR Green system with specific primers for elongation factor 1-&alpha; gene. The results showed that there is a significant difference between the amount of pathogen DNA in the roots of susceptible and tolerant plants, so Real time PCR technique is suitable for resistance screening of bean genotypes against Fusarium root rot. پوسیدگی فوزاریومی ریشه, ارزیابی مورفولوژیک, کمیت سنجی, رقم, لاین Fusarium root rot, Morphological evaluation, Quantitative, Cultivar, Line 53 64 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-285-1&slc_lang=fa&sid=1 Neda Zand ندا زند nedazand@znu.ac.ir 10031947532846003158 10031947532846003158 Yes Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Iran گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، ایران Roghayeh Hemmati رقیه همتی rhemati@znu.ac.ir 10031947532846003159 10031947532846003159 No Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Iran گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، ایران Hossein Jafary حسین جعفری hjafaryir@gmail.com 10031947532846003160 10031947532846003160 No Natural Resources Research and Education Center, AREEO, Zanjan, Iran. سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، زنجان، ایران