fa مقایسه بیان ژن نوکلئوکپسید ویروس پژمردگی لکه ای گوجه فرنگی در دو سویه باکتری E. coli مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها Microrganisms and Viruses پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b zar;">از آنجایی که روش&shy;های تولید آنتی بادی برای کاربرد در ویروس&shy;ها دارای محدودیت&shy;هایی می&shy;باشد، بیان پروتئین&shy; پوششی در سیستم پروکاریوتی به منظور تولید آنتی&shy;ژن انجام می&shy;شود. در پژوهش حاضر ژن نوکلئوکپسید ویروس پژمردگی لکه&shy;ای گوجه فرنگی از یک جدایه بومی در ایران تکثیر شده و پس از همسانه</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">&shy;</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">سازی، قطعه مربوط به ژن نوکلئوکپسید در سازه </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">pTG19TSWV-N</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> با آنزیم&shy;های </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">Bam</span></span></span></em></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">HI</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">Xho</span></span></span></em></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">I</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> خارج شد و در حامل بیانی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">pET32a(+)</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> برش یافته با آنزیم&shy;های </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">&nbsp;Bam</span></span></span></em></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">HI</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و</span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">Xho</span></span></span></em></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">I </span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">&nbsp;همسانه</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">&shy;</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">سازی شد. سپس، سازه </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">pET32TSWV-N</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به سویه&shy;های </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">BL21(DE3)</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">BL21(DE3) pLysS</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> از باکتری </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">E. coli</span></span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> انتقال یافت. بیان ژن نوکلئوکپسید با استفاده از القای پیشبر با غلظت یک میلی&shy;مولار </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">&nbsp;IPTG</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> در هر دو سویه صورت گرفت. چهار ساعت پس از القا، محیط&shy;های کشت باکتریایی جمع&shy;آوری شدند و محتوای پروتئینی استخراج شده از دو سویه مذکور در الکتروفورز عمودی بررسی شدند. با توجه به وزن مولکولی پروتئین بیان شده به همراه برچسب&shy;هایی که از پلاسمید به پروتئین اضافه شده بود، پروتئینی به اندازه حدود 48 کیلودالتون در الکتروفورز عمودی مشاهده شد. نتایج این تحقیق حاکی از بیان ژن نوکلئوکپسید در دو سویه مذکور بود در حالیکه بیان پروتئین در سویه باکتریایی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">BL21(DE3) pLysS</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> نسبت به </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:9.0pt;">BL21(DE3)</span></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">&nbsp; بیشتر بود.&nbsp; </span></strong><br> &nbsp; Because of limitations in antibody production against plant viruses, coat protein expression has been developed to prepare antigen for antibody production. In the recent research, Nucleocapsid gene of <em>Tomato spotted wilt</em> <em>virus</em> was amplified from a local strain in Iran. Cloned segment in TA vector (pTG19TSWV-N) was sub-cloned into pET32a as expression vector that digested by <em>Xho</em>I and <em>Bam</em>HI. Then, pET32TSWV-N was transformed in two different strains of <em>E. coli</em> BL21(DE3) and BL21(DE3) pLysS by heat shock method. For protein expression, the transformed cells were induced by 1mM of IPTG in both strains. The protein was extracted four hours after induction and analyzed in SDS-PAGE. The SDS-PAGE result showed that a 48 kDa protein have been expressed that is expected based on additional tags from plasmid. The result revealed that nucleocapsid had been expressed in both strains whereas protein expression was little more in BL21(DE3) pLysS.<br> &nbsp; بیان, سیستم پروکاریوتی, پروتئین نوترکیب, ویروس پژمردگی لکه‌ای گوجه‌فرنگی Expression, Prokaryotic expression, Recombinant protein. Tomato spotted wilt virus 91 102 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-286-1&slc_lang=fa&sid=1 Zahra Zaer زهرا زائر z.zaer90@gmail.com 10031947532846002215 10031947532846002215 No Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Iran گروه گیاهپزشکی ، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، ایران Davoud Koolivand داود کولیوند Koolivand@znu.ac.ir 10031947532846002216 10031947532846002216 Yes Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Iran گروه گیاهپزشکی ، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، ایران Omid Eini امید عینی omid.eii.@znu.ac.ir 10031947532846002217 10031947532846002217 No Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Iran گروه گیاهپزشکی ، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، ایران