fa طراحی و بیان کایمری پپتید لاکتوفرامپین - لاکتوفریسین گاوی با هدف تولید نوترکیب این پروتئین در گیاه توتون مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><strong><span style="font-family:B Zar;">لاکتوفرین که شامل پپتیدهای لاکتوفرامپین و لاکتوفریسین می‌باشد یکی از گلیکوپروتئین‌های شیر با خواص ضد میکروبی است. لاکتوفرین</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">به</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">عنوان</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">جزء</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">ذاتی</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">سیستم</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">ایمنی</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">مطرح</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">بوده</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">و</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">اولین</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">سد</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">دفاعی</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">در</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">برابر</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">حملات</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">میکروبی</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">را</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">نشان</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">می‌دهد. هدف از این پژوهش سنتز کایمری این دو زیر واحد پپتیدی و ارزیابی تاثیر پپتید نوترکیب تولید شده روی پاتوژن‌های شاخص مواد غذایی بود.</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">توالی کایمری لاکتوفرامپین-لاکتوفریسین پس از بهینه شدن بر اساس کدون ترجیحی بیان شونده در گیاه توتون، به صورت مصنوعی درون وکتور </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">&nbsp;pGH</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">سنتز شد و سپس به وکتور بیانی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">pBI121</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> منتقل گردید. پلاسمید بیانی نوترکیب از طریق فرآیند ذوب و انجماد به باکتری <em>آگروباکتریوم</em> <em>ریزوژنز</em> منتقل شد. در نهایت با کمک روش دیسک برگ به گیاه توتون منتقل گردید. استخراج پروتئین نوترکیب از گیاه توتون با استفاده از روش </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">Tris-HCl</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> انجام و فرآیند تخلیص با استفاده از کروماتوگرافی ستون‌های نیکل آگارز انجام شد. </span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">آزمایش </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">MIC</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> در میکروپلیت 96 خانه استریل و با روش رقیق سازی انجام شد</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"> .</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">در نهایت نتایج نشان داد که مقدار پروتئین نوترکیب 1/25&nbsp;میلی‌گرم در میلی‌لیتر می‌باشد و کیفیت مطلوبی نیز دارد. همچنین </span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">نتایج نشان داد که ترکیب کایمری اثر بازدارندگی خوبی روی میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا دارد.</span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"></span></strong></div> <div style="text-align: justify;">Lactoferrin, which consists of lactoferampin and lactoferricin peptides, is one of the milk glycoproteins with anti-microbial properties. Lactoferrin is known as a component of intrinsic immunity which points to first barrier against microbes. The aim of this study was the chimeric synthesis of this two peptides and also producing transgenic product. One of the desired methods to produce recombinant peptides is by transferring their genes to plant cells and producing hairy roots. In this study, the sequence of chimeric Lfampin-Lfcin was codon optimized based on Tobacco expression system. The target sequence was artificially synthesized in pGH vector and then sub-cloned into the pBI121 expression vector. The expression vector was transferred to <em>Agrobacterium</em> <em>rhizogenes</em> through freez- defreezing process. Then it was transferred to Tobacco plant using leaf disc method. Extraction of recombinant protein was done using Tris-HCl method and purification process was accomplished by chromatography Ni-agarose columns. Finally, the results showed that the amount of recombinant protein was 1.52 mg/ml and its quality was also desirable. The results also showed that chimeric composition has a good inhibitory effect on pathogenic microorganisms.</div> آگروباکتریوم ریزوژنز, پروتئین نوترکیب, گیاه توتون, لاکتوفرامپین - لاکتوفریسین . Lactoferrampine - Lactoferricin, Recombinant protein, Tobacco, Agrobacterium rhizogenes 40 54 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-371-1&slc_lang=fa&sid=1 Hamid Sarhadi حمید سرحدی sarhadihamid@yahoo.com 10031947532846003485 10031947532846003485 Yes Department of Food Science and Engineering, Bam branch, Islamic Azad University, Bam, Iran. گروه علوم و مهندسی صنایع غذایی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد بم، ایران Mohammad Hassan Jahandar محمد حسن جهاندار jahandar@iaubam.ac.ir 10031947532846003486 10031947532846003486 No Department of Food Science and Engineering, Bam branch, Islamic Azad University, Bam, Iran. گروه علوم و مهندسی صنایع غذایی، واحم بم، دانشگاه آزاد اسلامی، بم، ایران Abbas Tanhaeian عباس تنهائیان ab_tanhaeian@yahoo.com 10031947532846003487 10031947532846003487 No School of medicine, Shahrood University of medical Science, Shahrood, Iran. دانشگاه علوم پزشکی شاهرود، شاهرود، ایران