fa طراحی بیوانفورماتیکی و همسانه سازی ژن rT1 چای ترش برای ساخت وکتور نوترکیب pBI121-rT1 به منظور بیان در گیاهان مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">بیماری&shy;های تنفسی و التهاب ریوی از شایع&shy;ترین بیماری&shy;هایی است که بیش از 50 درصد مردم جهان را درگیر می&shy;کند. تاکنون داروهای مختلفی در زمینه پیشگیری و درمان این بیماری&shy;ها توسعه یافته است. پپتید </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">rT1</span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">، متعلق به گیاه دارویی چای ترش با طول 27 اسیدآمینه دارای خاصیت مهارکنندگی نوتروفیل الاستاز انسانی و پتانسیل بالقوه دارویی در زمینه پیشگیری و درمان بیماری&shy;های التهابی ریه است. باتوجه به ارزش اقتصادی بالای ترکیبات با خاصیت مهارکنندگی نوتروفیل الاستاز، در این پژوهش برای اولین بار با هدف بیان این پپتید در گیاهان، همسانه &shy;سازی و ساخت وکتور بیانی نوترکیب </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">pBI121-<em>rT1</em></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> انجام شد. باتوجه به نبودن توالی ژنی این پپتید در پایگاه&shy; های داده، ابتدا توالی ژنی مناسب آن براساس ترجیح کدونی گیاه توتون، وکتورهای بکار برده شده در پژوهش، ساختار و پایداری رونوشت حاصل از آن و خصوصیات پروتئین تولید شده از آن طراحی و سنتز شد. شاخص سازگاری کدونی برای توالی طراحی شده برابر با 92/0 و فراوانی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">GC</span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> 32/42 درصد محاسبه شد. پایداری پپتید طراحی شده در سلول&shy;های انسانی نسبت به پپتید اصلی 25 برابر افزایش یافت و شاخص ناپایداری برای پپتید طراحی شده برابر 90/20 محاسبه شد. به منظور همسانه &shy;سازی، توالی سنتز شده به وسیله واکنش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">PCR</span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> تکثیر و در وکتور </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">pMCS5</span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> همسانه&shy;سازی شد. سپس با هدف بیان این پپتید در گیاهان، زیرهمسانه &shy;سازی توالی طراحی شده، در وکتور بیانی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">pBI121</span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> تحت پروموتر</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;">CaMV 35S </span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">&nbsp;انجام شد. </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:red;"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"></span></span></span></strong></div> <div style="text-align: justify;">Respiratory diseases and pneumonia are among the most common diseases affecting more than 50% of the world&#39;s population. Various drugs have been developed to prevent and treat these diseases. rT1 peptide is a plant peptide isolated from the medicinal plant of <em>Hibiscus sabdariffa</em>. This 27-amino-acid peptide with inhibitory properties of human neutrophil elastase has been shown to have drug potential in the prevention and treatment of inflammatory lung diseases. Due to the high economic value of the compounds with neutrophil elastase inhibitory properties, in this study, for the first time, recombinant expression vector pBI121-<em>rT1</em> was constructed with the aim of expressing rT1 peptide in plants. Because of the lack of <em>rT1</em> gene sequence in databases, first, its appropriate gene sequence was designed and synthesized based on the <em>Nicotiana tubaccum</em> codon usage, the vectors used in this research, the structure and stability of its transcript and characteristics of the produced protein. For the designed sequence, the Codon Adaptation Index (CAI) and the GC frequency were 0.92 and 42.32%, respectively. In comparison to the main peptide, the stability of the designed peptide in human cells increased 25 times and its instability index calculated to be 20.90. Following amplification of the synthesized sequence by PCR reaction, it was cloned into pMCS5 vector. In order to express in plant-based systems, sub-cloning was performed in the expression vector pBI121 under the CaMV 35S promoter.</div> چای ترش, پپتید rT1, مهارکننده نوتروفیل الاستاز, التهاب تنفسی, pBI121-rT1 Hibiscus sabdariffa, rT1 peptide, neutrophil elastase inhibitor, respiratory inflammation, pBI121-rT1 47 57 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-120-3&slc_lang=fa&sid=1 Amin Sahandi Khalifeh-Kandy امین سهندی خلیفه کندی aminsahandi@yahoo.com 10031947532846004304 10031947532846004304 No Agricultural Biotechnology. Faculty of Agriculture and Natural Resources, Imam Khomeini International University, Qazvin, IRAN گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین‌المللی امام خمینی، قزوین، ایران fatemeh Dehghan Nayeri فاطمه دهقان نیری nayeri@eng.ikiu.ac.ir 10031947532846004305 10031947532846004305 Yes Agricultural Biotechnology Department, Faculty of Agriculture and Natural Resources, Imam Khomeini International University (IKIU), Qazvin, Iran. گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین‌المللی امام خمینی، قزوین، ایران