fa پارامترهای فیزیکی و بیولوژیکی موثر در ایجاد گیاهان ترانسپلاستوم توتون به روش بمباران ذره‌ای توسط PDS-1000/He مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:10pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" romans="" style="font-family:" times=""><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar="">بهینه‌سازی </span></b><b><span b="" lang="FA" style="font-family:" zar="">پارامترهای</span></b><b> </b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar="">مؤثر در روش بمباران ذره‌ای برای انتقال </span></b><b>DNA</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar=""> به کلروپلاست با کارایی بالا و بدون آسیب به بافت یک نیاز ضروری در ایجاد گیاهان ترانسپلاستوم می‌باشد. با توجه به تشابه نسبی موانع فیزیکی بر سر راه ورود ریزذرات به هسته و کلروپلاست معمولاً از ژن گزارشگر هسته‌ای </span></b><b><i>gus</i></b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar=""> استفاده می‌شود، ولی پارامترهای فیزیکی و بیولوژیکی درگیر در تراریختی پلاست‌ها بطور مستقیم گزارش نشده‌اند. در این تحقیق برای بهینه‌سازی انتقال ژن به کلروپلاست توتون پارامترهای نوع ریزذرات، غلظت </span></b><b>DNA</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar="">، فشار هلیوم شتاب‌دهنده، آرایش برگ، فاصله شلیک و مدت زمان پیش‌تیمار ریزنمونه‌ها قبل از بمباران بررسی شد. پس از انتقال ناقل کلروپلاستی به ریزنمونه‌های‌ برگی، باززایی گیاهان ترانسپلاستوم در محیط گزینش حاوی </span></b><b>mg/l</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar=""> 500 اسپکتینومایسین انجام شد. بیشترین تعداد ترانسپلاستوم (2.5 گیاه به ازای هر بمباران) از واحد آزمایشی شلیک شده با ریزذرات تنگستن با قطر </span></b><b>&mu;m</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar=""> 0.7، مقدار </span></b><b>DNA</b><b> </b><b>&mu;g</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar=""> 1، فشار هلیوم شتاب‌دهنده </span></b><b>psi</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar=""> 1100، فاصله شلیک 6 سانتی‌متر و دوره پیش</span></b><b>‌</b><b><span b="" lang="AR-SA" style="font-family:" zar="">تیمار 24 ساعت حاصل شد، و این پارامترها به عنوان دستورالعمل کارآمد تراریختی کلروپلاستی معرفی می‌شود. گیاهان هموپلاسم پس از سه دوره باززایی در حضور آنتی‌بیوتیک‌های استرپتو/اسپکتینومایسین بدست آمدند. تأیید مولکولی درج کاست بیانی در محل دقیق ژنوم و تأیید هموپلاسمی با استفاده از آنالیز </span></b><b>PCR</b><b><span b="" style="font-family:" zar=""> و لکه‌گذاری سادرن انجام شد. گیاهچه‌های سبز و آلبینوی حاصل از جوانه‌زنی بذور تولید شده از تلاقی متقابل بین گیاهان توتون شاهد و ترانسپلاستوم، توارث مادری ژن‌های انتقالی به کلروپلاست را تائید کرد.</span></b></span></span></span></span></div> <span dir="LTR"></span> <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:10pt"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" romans="" style="font-family:" times=""><span style="font-size:12.0pt">Optimization of the effective parameters in the biolistic method for high-performance DNA transferring into the chloroplasts without tissue damage is a necessary requirement for developing transplastomic plants. Due to the relative similarity of the physical barriers at the entry of microcarriers into the nucleus and chloroplasts, the nuclear <i>gus</i> reporter gene is usually used, but the physical and biological parameters involved in plastid engineering have not been directly reported. In this study, to optimize gene transfer to tobacco chloroplasts, some parameters such as microcarrier type, DNA concentration, helium accelerating pressure, leaf arrangement and shooting distance, and pretreatment duration of explants before bombardment were investigated. After transferring the chloroplast&#39;s vector to explants, regeneration of transplastomic plants was performed in a selection medium containing 500 mg/l spectinomycin. The highest number of transplastomic plants (2.5 plants per bombardment) was obtained with Tungsten particles with a diameter of 0.7 </span><span style="font-size:12.0pt"><span calibri="" style="font-family:">&mu;</span></span><span style="font-size:12.0pt">m, with 1 </span><span style="font-size:12.0pt"><span calibri="" style="font-family:">&mu;</span></span><span style="font-size:12.0pt">g DNA/shooting, accelerating helium pressure 1100 psi, shooting distance of 6 cm and 24h pre-treatment period. Homoplasmic plants were obtained after three re-regeneration periods at the presence of both strepto/spectinomycin antibiotics. Molecular confirmation of the correct insertion of expression cassette at the targeted place of the genome and the confirmation of homoplasmy were performed using PCR analysis and southern blotting. Maternal inheritance of the transferred genes into the chloroplasts was confirmed by green and albino seedlings resulted from seed germination, product of reciprocal crosses between control and transplastomic tobacco plants.</span></span></span></span></div> بمباران ذره‌ای, ترانسپلاستوم, تنگستن, توتون, کلروپلاست Chloroplast, Particle bombardment, Tobacco, Transplastomic, Tungsten 237 252 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-432-1&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Ehsasatvatan مریم احساسات‌وطن m.ehsasatvatan@yahoo.com 10031947532846004357 10031947532846004357 No Department of Plant Breeding & Biotechnology, Faculty of Agriculture, University of Tabriz گروه به‌نژادی و بیوتکنولوژی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تبریز، ایران Bahram Baghban Kohneh rouz بهرام باغبان کهنه‌روز bahramrouz@yahoo.com 10031947532846004358 10031947532846004358 Yes Department of Plant Breeding & Biotechnology, Faculty of Agriculture, University of Tabriz, Iran گروه به‌نژادی و بیوتکنولوژی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تبریز، ایران Ashraf Gholizadeh اشرف قلی‌زاده Aghz_bioch@yahoo.co.in 10031947532846004359 10031947532846004359 No Department of Animal Biology, Faculty of Natural Science, University of Tabriz دانشگاه تبریز، دانشکده علوم طبیعی، گروه زیست‌شناسی جانوری Hamideh Ofoghi حمیده افقی ofoghi@irost.ir 10031947532846004360 10031947532846004360 No Department of Biotechnology, Iranian Research Organization for Science and Technology (IROST), Tehran سازمان پژوهش‌های علمی و صنعتی ایران، پژوهشکده زیست‌فناوری Dariush Shanehbandi داریوش شانه‌بندی dariush_shanehbandi@yahoo.com 10031947532846004361 10031947532846004361 No Immunology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences دانشگاه علوم پزشکی تبریز، مرکز تحقیقات ایمونولوژی