fa همسانه‌سازی و بررسی ویژگی‌های ژن RGT2 از سویه‌ ایرانی مخمر نان مهندسی ژنتیک جانوری Animal پژوهشي Research <p dir="RTL"></p> <p dir="RTL"><strong>مخمر </strong><strong><em><span dir="LTR">Saccharomyces cerevisiae</span></em></strong><strong> دارای 20 ژن کدکننده‌ پروتئین‌های انتقال‌دهنده هگزوز است که شامل </strong><strong><em><span dir="LTR">HXT1-HXT17</span></em></strong><strong>، </strong><strong><em><span dir="LTR">GAL2</span></em></strong><strong><em>، </em></strong><strong><em><span dir="LTR">SNF3</span></em></strong><strong> و </strong><strong><em><span dir="LTR">RGT2</span></em></strong><strong> می‌باشد. دو ژن </strong><strong><em><span dir="LTR">SNF3</span></em></strong><strong> و </strong><strong><em><span dir="LTR">&nbsp;RGT2</span></em></strong><strong>به عنوان حسگر گلوکز عمل کرده </strong><strong>و ژن‌های</strong><strong><em><span dir="LTR">HXT1-HXT17</span></em></strong> <strong>در انتقال مستقیم گلوکز نقش دارند</strong><strong>. </strong><strong>پژوهشگران ثابت کردند که با افزایش میزان بیان این ژن‌ها سرعت تخمیر الکلی افزایش و در نتیجه‌ آن میزان تولید اتانول افزایش می‌یابد.</strong> <strong>هدف</strong> <strong>این</strong> <strong>مطالعه</strong> <strong>شناسایی</strong> <strong>و</strong> <strong>جداسازی</strong> <strong>ژن </strong><strong><em><span dir="LTR">RGT2</span></em></strong> <strong>یا </strong><strong><em><span dir="LTR">Restores Glucose Transport2</span></em></strong><strong> از</strong> <strong>ژنوم مخمر </strong>&nbsp;<strong><em><span dir="LTR">S. cerevisiae</span></em></strong><strong>از طریق </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong> <strong>و</strong> <strong>همسانه‌سازی</strong> <strong>آن</strong> <strong>در</strong> <strong>پلاسمید</strong> <strong>دارای</strong> <strong>پیشبر</strong> <strong>بیانی</strong> <strong>مناسب</strong> <strong>به</strong> <strong>منظور</strong> <strong>پایه‌ای</strong> <strong>برای</strong> <strong>طراحی</strong> <strong>پلاسمید</strong> <strong>بیانی و در نهایت</strong> <strong>مخمر</strong> <strong>نوترکیب</strong> <strong>بود.</strong><strong> در این تحقیق پس از تهیه آغازگرهای اختصاصی، ژن مورد نظر با روش </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong><strong> تکثیر شد و واکنش لیگاسیون بین قطعه‌ تکثیر یافته و پلاسمید </strong><strong><span dir="LTR">pGEM-T</span></strong><strong> انجام و کلونی‌های ترانسفورم شده از طریق سیستم گزینش آبی- سفید شناسایی شدند و در نهایت برای تایید نهایی قطعات همسانه شده،&nbsp; پلاسمیدهای نوترکیب به توالی‌یابی فرستاده شدند. بررسی نرم‌افزاری نشان داد که این ژن پروتئینی با وزن مولکولی173/83 کیلودالتون را کد کرده و دارای 763 اسیدآمینه بوده و نقطه ایزوالکتریک آن 68/5 می‌باشد. در ادامه، ژن </strong><strong><em><span dir="LTR">RGT2</span></em></strong> <strong>از طریق محل‌های برش آنزیمی </strong><strong><em><span dir="LTR">Pst</span></em></strong><strong><span dir="LTR">I</span></strong><strong> و </strong><strong><em><span dir="LTR">Nco</span></em></strong><strong><span dir="LTR">I</span></strong><strong> در پلاسمید </strong><strong><span dir="LTR">pGBKT7</span></strong><strong> همسانه‌سازی شد. توالی پروتئینی بدست آمده شباهت زیادی با </strong><strong><span dir="LTR">RGT2p</span></strong><strong> سویه‌های دیگر </strong><strong><em><span dir="LTR">S. cerevisiae</span></em></strong><strong> موجود در </strong><strong><span dir="LTR">NCBI</span></strong><strong> از جمله سویه </strong><strong><span dir="LTR">P301</span></strong><strong> (100 درصد تشابه) نشان داده و بررسی‌های فیلوژنتیکی با استفاده از سایر ژن‌های خانواده‌ انتقال‌دهنده‌های هگزوز نشان داد که </strong><strong><em><span dir="LTR">RGT2</span></em></strong><strong> بیشترین ارتباط و شباهت را با </strong><strong><em><span dir="LTR">SNF3</span></em></strong> <strong>دارد. با جداسازی و همسانه سازی و تعیین ویژگی و در نهایت انتقال این ژن به مخمر می‌توان میزان تولید اتانول را طی تخمیر الکلی افزایش داد.</strong></p> <p>the yeast <em>Saccharomyces cerevisiae</em>&nbsp; has 20 genes that encode Hexose Transporter proteins, including <em>HXT1-HXT17</em>, <em>GAL2</em>, <em>SNF3</em> and <em>RGT2</em>. Two of these genes (<em>SNF3</em> and <em>RGT2</em>) act as glucose sensors while the <em>HXT1-HXT17</em> genes function in direct transportation of glucose. Earlier research has shown that alcohol fermentation can be augmented by increasing the expression of these genes, resulting in increasing ethanol production. The aim of this study was the identification and isolation of the Restores Glucose Transport 2 (<em>RGT2</em>) gene from <em>Saccharomyces cerevisiae</em> genome. Specific primers were employed in PCR so as to clone <em>RGT2</em> into a vector under a suitable expression promoter for recombinant yeast. After gene amplification, ligation was achieved between the amplified fragments and pGEM-T vector and the recombinant colonies were identified by the blue-white screening method. Candidate recombinant plasmids were sequenced. The nucleotide sequence of the open reading frame was found to be 2292 bp long with a deduced amino acid of 763 residues. The estimated molecular mass and the predicted isoelectric point of the deduced polypeptide were 83.173 kDa and 5.68 respectively. The deduced protein sequence showed a high similarity to <em>RGT2</em> sequences in the NCBI database, especially with P301 strain of <em>Saccharomyces cerevisiae </em>(100 % similarity). Finally, the <em>RGT2</em> gene was cloned into the pGBKT7 expression vector which is suitable for protein expression in yeast via the restriction sites <em>Nco</em>I and <em>Pst</em>I. A phylogenic study of the <em>RGT2</em> gene and other hexose transporter families showed that this gene has the most similarity with <em>SNF3</em>.&nbsp; Therefore, by isolation, cloning and sequence identification and transformation of this gene into yeast, ethanol production via alcohol fermentation can be increased.</p> پلاسمید نوترکیب RGT2 مخمر S. cerevisiae همسانه‌سازی Cloning, RGT2, Fermentation, Saccharomyces cerevisiae 11 24 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-49-1&slc_lang=fa&sid=1 Solmaz Azizi سولماز عزیزی solmazazizi@ymail.com 10031947532846001663 10031947532846001663 No Azarbaijan Shahid Madani University دانشگاه شهید مدنی آذربایجان Alireza Tarinejad علیرضا تاری نژاد tarinejad@azaruniv.ac.ir 10031947532846001664 10031947532846001664 Yes Azarbaijan Shahid Madani University دانشگاه شهید مدنی آذربایجان