fa بررسی اثر سازگاری سویه در بیان موقت مبتنی بر روش اگروباکتریوم در ارقام خربزه (Cucumis melo L.) مهندسی ژنتیک جانوری Animal پژوهشي Research <p class="MsoNoSpacing" dir="rtl" style="line-height: 150% direction: rtl unicode-bidi: embed"><strong>بیان موقت یک ژن اثرگذار در بیماری&shy;زایی </strong><strong><span dir="LTR">(effector)</span></strong><strong> در گیاه میزبان با استفاده از اگرواینجکشن، یک روش قابل قبول برای بررسی نقش ژن در بیماری&shy;زایی است. در این مطالعه تاثیر دو سویه اگروباکتریوم بر چهار رقم استاندارد و دو &nbsp;رقم محلی خربزه در بررسی بیان موقت مورد ارزیابی قرار گرفت. سازگاری سویه&shy; های </strong><strong><span dir="LTR">LBA4404 </span></strong><strong>&nbsp;و </strong><strong><span dir="LTR">GV3101 </span></strong><strong>&nbsp;به وسیله تزریق سلولهای باکتری به برگ ارقام خربزه تعیین شد. زنده&shy;مانی سلول&shy;های اگروباکتریوم تزریق شده در بافت برگ به وسیله ارزیابی بیان پروکاریوتی ژن </strong><strong><span dir="LTR">GUS</span></strong><strong> 24 ساعت پس از تزریق تعیین شد. سویه </strong><strong><span dir="LTR">LBA4404 </span></strong>&nbsp;<strong>&nbsp;پس از انتقال </strong><strong>ناقل </strong><strong><span dir="LTR">pCAMBIA3301 </span></strong><strong>&nbsp;دارای ژن </strong><strong><span dir="LTR">GUS</span></strong><strong> اینترون&shy;دار</strong> <strong>به عنوان کنترل مثبت </strong><strong>برای تایید بیان موقت این ژن در سلول&shy;های گیاه استفاده شد. انتقال ناقل&shy;های </strong><strong><span dir="LTR">pBI121 </span></strong><strong>&nbsp;و </strong><strong><span dir="LTR">pCAMBIA3301 </span></strong><strong>&nbsp;به سویه </strong><strong><span dir="LTR">LBA4404 </span></strong><strong>&nbsp;&nbsp;با روش کلنی </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong><strong> با آغازگر&shy;های </strong><strong><span dir="LTR">PSh3-F/R</span></strong><strong> تایید شد. راندمان بیان موقت در برگ&shy;های ارقام خربزه، 48 ساعت پس از اگرواینجکشن سویه </strong><strong><span dir="LTR">&nbsp;LBA4404 </span></strong><strong>&nbsp;حامل ناقل </strong><strong><span dir="LTR">pCAMBIA3301 </span></strong><strong>&nbsp;&nbsp;به وسیله سنجش هیستوشیمیایی ژن </strong><strong><span dir="LTR">GUS</span></strong><strong>&nbsp; مشخص شد. برگ&shy;های تزریق شده با سویه </strong><strong><span dir="LTR">LBA4404 </span></strong><strong>&nbsp;دارای ناقل </strong><strong><span dir="LTR">pBI121 </span></strong><strong>&nbsp;&nbsp;فعالیت ژن </strong><strong><span dir="LTR">GUS</span></strong><strong> را نشان دادند که تایید کننده زنده بودن سلول&shy;های اگروباکتریوم در برگ ارقام خربزه بود. تمام ارقام ژن </strong><strong><span dir="LTR">GUS</span></strong><strong> را به صورت موقت با استفاده از اگرواینجکشن پس از گذشت 24 ساعت بیان کردند. این نتایج می تواند در مطالعات آینده به منظور بررسی عملکرد ژن&shy;های اثرگذار منتخب در برهمکنش با ارقام استاندارد خربزه مورد استفاده قرار گیرد.</strong><span lang="AR-SA" style="font-size: 12pt line-height: 150% font-family: 'B Lotus'"></span></p> <p><span style="font-size: 10pt line-height: 115% font-family: 'Times New Roman', serif"></span>transient expression of a candidate effector gene in host plants following Agroinfiltration is a useful method to investigate the role of the gene in pathogenecity. In this study, the effects of two <em>Agrobacterium</em> <em>tumefaciens</em> strains on four standard melon lines and two Iranian melon cultivars were investigated to establish transient expression in melon. Compatibility of the LBA4404 and GV3101 strains was defined by injection of the bacterial suspensions into the leaves of cultivars. Viability of the injected <em>Agrobacterium</em> strain cells in leaf tissues was evaluated 24 hours after injection by prokaryotic GUS reporter gene assay. The LBA4404 strain harboring the pCAMBIA3301 vector containing an intron-GUS reporter gene was used to confirm eukaryotic GUS expression in the plant cells. The LBA4404 strain was transformed by the pBI121 and pCAMBIA3301 expression vectors and transient transformation was confirmed by colony PCR technique using the PSh3-F/R primers. The efficiency of transient transformation of the melon leaves was evaluated 48 hours after Agroinjection of the LBA4404 strain containing pCAMBIA3301 by the histochemical GUS assay. The leaves that were injected by LBA4404 harboring pBI121 showed GUS activity. All the melon cultivars transiently expressed the GUS reporter gene 24 hours after Agroinjection. These findings could be used in the future studies to evaluate function of candidate effector genes in interaction with standard melon lines.</p> <p></p> ارقام استاندارد خربزه اگروباکتریوم بیان موقت سنجش GUS Agroinjection , GUS assay, Melon, Transient expression 76 86 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-100-1&slc_lang=fa&sid=1 Sahba Toosi صهبا طوسی sahba.toosi@gmail.com 10031947532846001566 10031947532846001566 No Ferdowsi University of Mashhad, Iran. دانشگاه فردوسی مشهد Farhad Shokouhifar فرهاد شکوهی فر Shokouhifar@um.ac.ir 10031947532846001567 10031947532846001567 Yes Ferdowsi University of Mashhad, Iran. دانشگاه فردوسی مشهد Saeid Malekzadeh Shafaroudi سعید ملک زاده شفارودی malekzadeh-s@ um. ac .ir 10031947532846001568 10031947532846001568 No Ferdowsi University of Mashhad, Iran. دانشگاه فردوسی مشهد Abdolreza Bagheri عبدالرضا باقری abagheri@um.ac.ir 10031947532846001569 10031947532846001569 No Ferdowsi University of Mashhad, Iran. دانشگاه فردوسی مشهد