|
همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel6B در مخمر Pichia pastoris
|
فهیمه حیدری قره سو   ، نسرین مشتاقی* ، براتعلی مشکانی ، سعید ملکزاده شفارودی |
| گروه بیوتکنولوژی و به‌نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، ایران ، nasrinmoshtagi@yahoo.com |
|
|
چکیده: (4398 مشاهده) |
آنزیم Cel6B از باکتری Thermobifidia fusca، یک CBHII متعلق به خانواده بی سلولازهاست که بسیار مقاوم به حرارت است. به علت میزان پایین تولید این آنزیم در میزبان اولیه نمی‌توان از این میزبان برای تولید آنزیم در مقیاس صنعتی استفاده نمود. به منظور بیان این آنزیم در مخمر، ژن سلوبیوهیدرولاز موجود در سازه PSZ143 با PCR تکثیر و به درون ناقل مخمری pPICZαA، همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب حاوی ژن cel6B، به باکتری Jm109 E. coli منتقل شده و باکتری‌های نوترکیب بر روی محیط کشت LB حاوی µg/ml5/0 بلئومایسین، انتخاب شد. سازه نوترکیب خطی شده، با استفاده از الکتروپوریشن به مخمرPichia pastoris سویه‌های GS115 و KM71H منتقل شد. در نهایت بهترین غلظت متانول و بهترین روز بیان آنزیم نیز با روش DNS تعیین شد. نتایج نشان داد، بیشترین میزان فعالیت سلوبیوهیدرولاز در سویه‌های GS115 و KM71H و بر روی PC (پنبه اسید فسفریک شده) در دمای C°50 و به مدت 16 ساعت، به ترتیب 98/1 و U(mmol/min)/ml 475/0 است. نمونه مربوط به کلنی پر محصول سویه GS115 بر روی ژل SDS-PAGE بارگزاری و بیان آنزیم تأیید شد و سپس نتایج بهترین غلظت متانول و بهترین روز بیان آنزیم با همین سویه، در روز چهارم بعد از القاء با 3 درصد متانول (V/V) به‌دست آمد. عدم بهینه‌سازی کدون های ژن همسانه شده به پلاسمید مخمری باعث کاهش بیان و کاهش فعالیت سلوبیوهیدرولازی آن شد. مخمر پیشیا میزبان مناسبی برای بیان این آنزیم است که با بهینه‌سازی کدونهای توالی کدکننده این ژن، می‌توان بازدهی بیان را بهبود داد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: مخمر، سلوبیوهیدرولاز، فرآوری زیستی تلفیقی، ژن cel6B |
|
|
متن کامل [PDF 1513 kb]
(1736 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: 1397/7/22 | پذیرش: 1397/11/17 | انتشار: 1397/11/26
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
