گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان، سنندج، ایران ، m.hajizadeh@uok.ac.ir
چکیده: (3832 مشاهده)
ویروس لکه برگی کلروتیک سیب (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV)یکی از ویروسهای مهم درختان میوه دانه دار و هسته دار میباشد که گسترش جهانی دارد. هدفازاینمطالعه، ساخت سازه بیانی وسپس بیانژنپروتئینپوششی (Coat Protein (CP))ویروس لکه برگی کلروتیک سیب در باکتری Escherichia coliمیباشد. بیان پروتئین پوششی در سیستم پروکاریوتی، نیازبهخالصسازیویروس از گیاه میزبانراکهمستلزموجوداولتراسانتریفوژاست،مرتفعمیسازد. به منظور تولید پروتئین پوششی نوترکیب، جدایه SSa از میزبان سیب جداسازی و با آغازگرهایاختصاصیACLSV-MF وACLSV-MR ژن کامل پروتئین پوششی به طول 582 جفت باز تکثیر شد. ژن کامل CP به حامل همسانه‌سازی pTG19 متصل و به باکتریE. coli سویه DH5α منتقل شد. باکتری‌های تراریختشدهباپلاسمیدنوترکیبرویمحیطکشت LB حاویآمپیسیلین، X-Gal و IPTG غربالوبهروشتجزیهقلیاییاستخراجگردیدند.این ژن در پلاسمیداستخراجشدهباآنزیمهای BamHIو XhoIکه محل اثر آنها در آغازگرها قرار داده شده بودند، برش وبهحاملبیانpET28a(+) که با همین دو آنزیم برش داده شده بودند، اتصالدادهشد.pET28a (+) حاوی ژن CP ویروس در باکتری E. coli سویه BL21(DE3) ترانسفورم و سپس القاء بیان CP با اضافه نمودن IPTG در غلظت نهایی 1mM پس از چهار ساعت در الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید حاوی سدیم دودسیل سولفات (SDS-PAGE) بررسی شد. نتایج حاصل از SDS-PAGE حاکی از بیان پروتئین حدود 26 کیلودالتونی مربوط به ژن پروتئین پوششی ویروس مذکور بود. بیان این پروتئین میتواند برای تولید آنتی بادی بر علیه ACLSV مورد استفاده قرار گیرد.
