|
همسانه سازی و بیان هترولوگ لاکاز در Pichia pastoris و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی لاکاز نوترکیب
|
الهام سلیمانی   ، قربانعلی نعمت زاده* ، روحا کسری کرمانشاهی ، سوسانا رودریگز کوتو |
| پژوهشکده ژنتیک و زیست‌فناوری کشاورزی طبرستان، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری ، Gh.nematzadeh@gmail.com |
|
|
چکیده: (4700 مشاهده) |
لاکازها آنزیمهایی حاوی مس میباشند که اکسیداسیون ترکیبات آروماتیک و غیرآروماتیک را از طریق احیای مولکول اکسیژن به آب کاتالیز میکنند . همچنین به دلیل قابلیت اکسیداسیون طیف وسیعی از ترکیبات فنلی کاربرد وسیعی در صنعت دارند. در این مطالعه توالی نوکلئوتیدی ژن لاکاز بر اساس ترجیح کدونی میزبان مخمری Pichia pastoris GS115 بهینه شد، سپس توسط شرکت اینویتروژن سنتز و در حامل بیانی pPICZ alpha A همسانه سازی شد و تحت پیشبر AOX1 به مخمر پیکیا پاستوریس به روش الکتروپوریشن منتقل شد. به منظور تعیین شرایط بهینه بیش بیان آنزیم، در سطوح مختلفی از دما، غلظت مس و متانول القای بیان صورت گرفت و فعالیت آنزیم در هریک از سطوح ارزیابی شد. بیش بیان آنزیم در غلظت 4/0 میلی مولار مس و 8/0 درصد متانول و دمای 25 درجه سانتیگراد به دست آمد. بیش بیان ترشحی لاکاز در شرایط بهینه U/L 9600 به دستآمد. پس از بررسی کیفی و کمی آنزیم برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم تعیین شد. دما و pH بهینه لاکاز نوترکیب به ترتیب40 درجه سانتیگراد و 3 تعیین شد. بررسی پایداری دمایی و pH لاکاز نشان داد که این آنزیم پایداری بالایی در برابر حرارت داشته و قادر به فعالیت در طیف وسیعی از pH میباشد. بررسی خصوصیات کینتیکی آنزیم با استفاده از سوبسترای ABTS، mM ۰۸۹/۰ Km= تعیین شد. نتایج این تحقیق نشان داد که مخمر پیکیا پاستوریس میتواند کاندیدای مناسبی برای بیان لاکاز نوترکیب به منظور استفاده در صنایع متعدد جهت پاکسازی پساب، بیوسنسور و سایر کاربردها باشد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: لاکاز، پیکیا پاستوریس، بیان هترولوگ، زیست‌پالایی، همسانه سازی |
|
|
متن کامل [PDF 898 kb]
(1539 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: 1398/4/19 | پذیرش: 1398/6/4 | انتشار: 1398/8/20
|
|
|
|
|
|
