fa ارزیابی سریع پیشبرهای بذری در برگ با استفاده از فاکتور رونویسی LEC2 مهندسی ژنتیک گیاهی Plant پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b zar;">فاکتور رونویسی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LEC2</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> یکی از فاکتورهای رونویسی است که با اتصال به توالی پیشبرهای بذری سبب بیان ژن</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">های پایین دستی می</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">شود. استفاده از این فاکتور رونویسی در کنار روش آگرواینفیلتریشن می</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">تواند زمان ارزیابی پیشبرهای بذری را با توجه به حذف زمان طولانی مدت انتقال دائم تا بذردهی کاهش دهد. در این تحقیق اختصاصی بودن بیان بذری ژن تحت کنترل پیشبر </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">FAD2-1</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> پس از جداسازی از گیاه گلرنگ با استفاده از آنالیز بیان ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GUS</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> در برگهای توتون مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج توالی</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">یابی پیشبر </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">FAD2-1</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> نشان داد که این قطعه جدا شده از بالادست ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">FAD2-1</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> حاوی عناصر اساسی برای بیان اختصاصی در بذر است. جهت ارزیابی سریع اختصاصی بودن بیان بذری در پیشبر ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">FAD2-1</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> دو کاست ژنی طراحی گردید: کاست ژنی اول </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pFAD2-GUS </span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">&nbsp;(ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">GUS</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و پیشبر ژن </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">(<em>FAD2-1</em></span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و کاست ژنی دوم </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pBI-LEC2 </span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">&nbsp;(ژن </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LEC2</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و پیشبر </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">35S</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">). کاست</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">های ژنی به صورت جداگانه در وکتور </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pBI121</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> کلون شده و در نهایت به سویه </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">EHA105</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> آگروباکتریوم منتقل شدند. به منظور بررسی سریع عملکرد این پیشبر، آگروباکتریوم</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">های حاوی دو سازه بصورت جداگانه آماده و کشت شده و پس از تنظیم غلظت هر دو کشت بر روی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">OD₆₀₀=0.6</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به نسبت مساوی با هم مخلوط و به برگهای توتون تزریق شد. با آبی شدن برگهای تزریق شده با سازه یک+سازه دو و عدم مشاهده رنگ در برگهای تزریق شده با سازه یک یا سازه دو اختصاصی بودن بیان بذری این پیشبر تایید شد. نتایج نشان داد که فاکتور رونویسی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LEC2</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> با شناسایی توالی</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">های خاص در بالادست ژنهای بذری سبب بیان ژنهای پایین دستی می</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">شود. از اینرو این تحقیق پیشنهاد می</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">کند که فاکتور رونویسی </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">LEC2</span></span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به همراه روش آگروینفیلتریشن می</span></strong><strong><span style="font-family:cambria,serif;">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">تواند به عنوان ابزاری کارا و سریع در تایید قطعاتی که بالقوه به عنوان پیشبر بذری جداسازی می&shy;شوند، استفاده شود.</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:5.0pt;"></span></span></span></strong><br> &nbsp; LEC2 as a transcriptional factor attaches to seed-specific promoters and induces the expression of downstream genes. Analysis of permanent gene transfer in plants is time-consuming and has long process. Using this transcription factor along with the agroinfiltration method can reduce significantly the time of seed specific promoter evaluation. In this research, seed specificity of <em>FAD2-1</em> promoter, isolated from safflower plants, was studied by <em>GUS</em> expression analysis in tobacco leaves.<em> Fad2-</em>1 promoter sequence analysis indicated that this promoter is containing essential elements for seed-specific function. For analyzing <em>FAD2-1 </em>promoter function, we constructed two gene cassettes: pFAD2-GUS (<em>GUS</em> gene under the control of <em>FAD2-1</em> promoter) and pBI-LEC2 (LEC2 gene under the control of CaMV35S promoter). These cassettes were cloned in pBI121 vector and transferred to <em>Agrobacteriun tumefacience</em> EHA105, separately. For seed-specific function analysis of <em>FAD2-1</em> promoter in tobacco leaves, the overnight culture of Agrobacteriums were adjusted to OD₆₀₀=0.6, mixed equally and then used to infiltrate into tobacco leaves. GUS assay analysis of infiltrated leaves indicated the specific expression of the reporter gene (<em>GUS</em>). Therefore, <em>FAD2-</em>1 promoter is suggested as a seed specific promoter. Our results suggest that LEC2 along with agroinfiltration method can use as a rapid and confident tool for verifying seed specific expression of any seed-specific promoters.<br> &nbsp; آگرواینفیلتریشن, آنالیز پیشبر, پیشبر بذری, LEC2 Agroinfilteration, promoter analysis, seed promoter, LEC2 115 123 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-289-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Afsharshandiz محمد افشار شاندیز afsharshandiz@ut.ac.ir 10031947532846003161 10031947532846003161 No University of Tehran,Agricultural Research,Education and Extension Organization(AREEO) دانشگاه تهران- پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران Hassan Rahnama حسن رهنما hrahnama@abrii.ac.ir 10031947532846003162 10031947532846003162 Yes Agricultural Biotechnology Research Institute of Iran, Agricultural Research, Education and Extension Organization, Karaj, Iran پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران Hosien Azarnivand حسین آذرنیوند hazar@ut.ac.ir 10031947532846003163 10031947532846003163 No University of Tehran دانشگاه تهران