en شناسایی گروه غالب ویروس اس سیب زمینی (PVS) در ایران و بیان ژن پوشش پروتئینی آن مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها Microrganisms and Viruses پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b zar;">بیان ژن ویروس&shy;ها در باکتری</span></strong><strong><span dir="LTR">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> برای مطالعه پروتئین ویروس</span></strong><strong><span dir="LTR">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">ها و تولید آنتی</span></strong><strong><span dir="LTR">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">بادی</span></strong><strong><span dir="LTR">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> اختصاصی مورد استفاده قرار می&shy;گیرد. در این پژوهش، نمونه &shy;های سیب&shy;زمینی از هشت استان ایران جمع &shy;آوری شده و ردیابی ویروس </span></strong><strong><em><span dir="LTR">Potato virus S</span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;">، به عنوان یکی از مخرب&shy;ترین ویروس&shy;های سیب&shy;زمینی، بوسیله داس-الیزا و آرتی-پی&shy; سی&shy; آر انجام گرفت. تعیین گروه غالب با توجه به توالی ژن پوشش پروتئینی و پس از تجزیه فیلوژنی انجام شد. ژن کامل </span></strong><strong><span dir="LTR">CP</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> تکثیر و همسانه &shy;سازی شده و مورد توالی&shy; یابی قرار گرفت، سپس از پلاسمید </span></strong><strong><span dir="LTR">pJET1.2/blunt</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> برش داده شده و به پلاسمید بیان </span></strong><strong><span dir="LTR">pET-28a (+)</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> متصل شد و سازه (</span></strong><strong><span dir="LTR">pET-28a:PVS:CP</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">) به باکتری </span></strong><strong><em><span dir="LTR">Escherichia coli</span></em></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> سویه </span></strong><strong><span dir="LTR">BL21</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> منتقل شد. بهینه &shy;سازی بیان ژن با القا بوسیله </span></strong><strong><span dir="LTR">IPTG</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> در</span></strong> <strong><span style="font-family:b zar;">غلظت&shy;های 5/0، 1 و 2 </span></strong><strong><span dir="LTR">mM</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به مدت 3، 4 و 6 ساعت انجام گرفت و توسط </span></strong><strong><span dir="LTR">SDS-PAGE</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و وسترن بلات تایید شد. بر اساس توالی نوکلئوتیدی، جدایه</span></strong><strong><span dir="LTR">&shy;</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;">های ایرانی </span></strong><strong><span dir="LTR">PVS</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> به سه گروه تقسیم شدند که یک گروه با 22 عضو به عنوان گروه غالب شناخته شد. بیان پروتئین نوترکیب با وزن 34 کیلودالتون توسط وسترن تایید شد. القاء با غلظت 1 میلی&shy; مولار </span></strong><strong><span dir="LTR">IPTG</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> و به مدت 4 ساعت بهترین بیان را نشان داد. این نخستین گزارش بیان ژن پوشش پروتئینی ویروس </span></strong><strong><span dir="LTR">PVS</span></strong><strong><span style="font-family:b zar;"> است که برای تهیه آنتی&shy; بادی این ویروس اهمیت دارد.</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:5.0pt;"></span></span></span></strong> Gene expression in bacteria have already been used to study the protein of viruses and to produce specific antibodies. In this research, potato samples were collected from eight provinces of Iran and were tested for <em>Potato virus S</em>, as one of the most destructive viruses of potato fields, by DAS-ELISA and RT-PCR. Dominant isolate of PVS was selected according to coat protein (CP) gene sequences following phylogenetic analysis. Full length CP gene was amplified, cloned and sequenced, then was digested from pJET1.2/blunt vector, ligated into the expression vector pET-28a and the construct (pET-28a:PVS:CP) was transformed into <em>Escherichia coli</em> BL21 strain. Gene expression was optimized by induction with 0.5, 1 and 2 mM final concentrations of IPTG for 3, 4 and 6 h and was verified by SDS-PAGE and Western blotting. Based on the nucleotide analysis, the Iranian isolates of PVS were divided into three groups that one group with 22 members known as the dominant group. The expression of recombinant CP of about 34 kDa was proved by western blotting. Induction by 1 mM IPTG for 4 h proved to be the most efficient method of expression. This is the first report of the expression of PVS CP gene, which is important for the preparation of anti-PVS antibody. ویروس اس سیب‌زمینی, بیان ژن, پروتئین نوترکیب, تجزیه فیلوژنتیکی, PVS Potato virus S, Gene expression, Recombinant protein, Phylogenetic analysis, PVS 153 162 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-295-1&slc_lang=en&sid=1 Nahid Masoudi ناهید مسعودی nm_masoudi@yahoo.com 10031947532846002357 10031947532846002357 No Department of Plant protection, College of Agriculture, University of Guilan, Rasht, Iran. گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Ahmad Rouhibakhsh احمد روحی بخش a_rouhibakhsh1966@yahoo.com 10031947532846002358 10031947532846002358 Yes Department of Plant protection, College of Agriculture, University of Guilan, Rasht, Iran. گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران Mohammad Hassan Asareh محمدحسن عصاره Asare@gmail.com 10031947532846002359 10031947532846002359 No Agricultural Research, Education and Extension, Seed and Plant Certification and Registration Institute, Karaj, Iran. موسسه تحقیقات ثبت و گواهی بذر و نهال، کرج، ایران Masoud Naderpour مسعود نادرپور Masoud7995@yahoo.com 10031947532846002360 10031947532846002360 No Agricultural Research, Education and Extension, Seed and Plant Certification and Registration Institute, Karaj, Iran. موسسه تحقیقات ثبت و گواهی بذر و نهال Davoud Koolivand داود کولیوند Koolivand@znu.ac.ir 10031947532846002361 10031947532846002361 No Department of Plant Protection, College of Agriculture, University of Zanjan, Zanjan, Iran. گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، زنجان، ایران