fa بررسی نقش پروتئازهای همولمف بر فعالیت فنل اکسیداز لارو ‌Cydalima perspectalis با استفاده از بازدارنده‌های اختصاصی ایمنی زیستی Biosafety پژوهشي Research <strong><span style="font-family:B Zar;">جریان پروتئازی در </span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">همولنف </span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">حشرات نقش مهمی در پاسخ مناسب میزبان علیه میکروارگانیسم&rlm;ها و پارازیتوییدهای مهاجم دارد. این سرین پروتئازها سبب القای مسیرهای مولکولی تولید پپتیدهای ضدمیکروبی و فنل&rlm;اکسیداز در حشرات می&rlm;شوند. در پژوهش حاضر تأثیر حداقل غلظت از سه بازندارنده اختصاصی سرین پروتئازها؛ </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">AEBSF.HCl [4-(2-aminoethyl) benzenesulfonyl fluoride hydrochloride] </span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">، </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">TLCK [tosyllysine chloromethyl ketone hydrochloride] </span></span></strong>&nbsp;<strong><span style="font-family:B Zar;">و </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">TPCK [tosyl phenylalanyl chloromethyl ketone]</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> بر فعالیت تریپسین، کیموتریپسین، الاستاز و در نهایت آنزیم فنل&rlm;اکسیداز لاروهای شب&rlm; پره شمشاد، </span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">Cydalima perspectalis </span></span></em></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">Walker</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;">،</span></strong> <strong><span style="font-family:B Zar;">ارزیابی شد. غلظت 5 میکرومولار </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">AEBSF.HCl</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> سبب کاهش معنی&rlm; دار فعالیت آنزیم&rlm;های تریپسین، کیموتریپسین و فنل اکسیداز در بازه &rlm;های زمانی 1، 15، 30 و 60 دقیقه پس از تزریق شد، اما 120 و 180 دقیقه بعد از تزریق به مقدار شاهد رسید. این بازدارنده اثر معنی&rlm; داری بر فعالیت آنزیم الاستاز نشان نداد. غلظت 5 میکرومولار بازدارنده </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">TLCK</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> نیز سبب کاهش فعالیت آنزیم&rlm; تریپسین در بازه&rlm;های زمانی 1، 15، 30 و 60 دقیقه شد و فعالیت آنزیم فنل&rlm;اکسیداز را در همه بازه &rlm;های زمانی به جز 180 دقیقه کاهش داد که کمترین مقدار آن 15 دقیقه پس از تزریق مشاهده شد. بازدارنده </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;">TPCK</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Zar;"> سبب کاهش فعالیت آنزیم کیموتریپسین در همه بازه&rlm;های زمانی پس از تزریق به جز 180 دقیقه شده و حداقل فعالیت 1 دقیقه پس از تزریق ثبت شد. این بازدارنده فعالیت آنزیم فنل اکسیداز را در بازه &rlm;های زمانی 1، 15 و 30 دقیقه پس از تیمار کاهش داد و در سایر بازه&rlm; های زمانی تأثیر معنی&rlm; داری مشاهده نشد. این نتایج نشان&rlm; دهنده اهمیت سرین پروتئازها در القای فعالیت سامانه فنل&rlm;اکسیداز در لاروهای شب&rlm; پره شمشاد می&rlm;باشند. بازدارنده &shy;های استفاده شده در این پژوهش می&shy;توانند با توقف روند سرین پروتئازی در همولمف حشرات از ایمنی کارآمد در برابر بیمارگران جلوگیری کنند و حساسیت لاروها را نسبت به بیمارگران افزایش دهند. به عبارت دیگر استفاده از این ترکیبات کنترل موثر آفات از طریق کنترل میکروبی را بهبود می&shy;بخشند.</span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"></span></span></strong><br> <span dir="LTR"></span> <div style="text-align: justify;">Protease cascade in insect hemolymph is important in proper response against invading microorganisms and parasitoids. Serine proteases lead to the induction of antimicrobial peptide syntheses and phenoloxidases. In the current study, the effects of the least concentration of the three specific inhibitors of serine proteases including AEBSF.HCl [4-(2-aminoethyl) benzenesulfonyl fluoride hydrochloride], TLCK [tosyllysine chloromethyl ketone hydrochloride] and TPCK [tosyl phenylalanyl chloromethyl ketone] were evaluated on the activities of trypsin, chymotrypsin, elastase and phenoloxidase of <em>Cydalima perspectalis</em> larvae. The 5 &micro;M concentration of AEBSF.HCl lead to the significant decrease of trypsin, chymotrypsin and phenoloxidase activities at the time intervals of 1, 15, 30- and 60-min post-injection while the activities reached to the value of control after 120 and 180 min. The inhibitor showed no significant effect on elastase activity. The 5 &micro;M concentration of TLCK also decreased the activity of trypsin at the time intervals of 1, 15, 30- and 60-min while the activity of phenoloxidase decreased at all-time intervals except for 180 min post-injection which the least value was obtain after 15 min of injection. TPCK decreased the activity of chymotrypsin at all-time intervals following injection except for 180 min in which the least activity was recorded after 1 min. This inhibitor decreased the activity of phenoloxidase at the time intervals of 1, 15 and 30 min after injection while no significant differences were observed at other time intervals. These results demonstrate the important role of serine proteases in induction of phenoloxidase within <em>C.perspectalis</em> larvae. Inhibitors used in this study can prevent effective immunity of insects by stopping the serine protease process in insect hemolymph and increase the sensitivity of larvae against pathogen. In other words, the use of these compounds improves the effective control of pests through microbial control.</div> سرین پروتئاز, فنل‌اکسیداز, سامانه دفاعی سلولی, شب‌پره شمشاد Serine protease, Phenoloxidase, Cellular immune system, Cydalima perspectalis 194 203 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-394-1&slc_lang=fa&sid=1 Leila Yousefi-Lardeh لیلا یوسفی-لرده Leila.Yousefi@gmail.com 10031947532846003664 10031947532846003664 No Department of Plant Protection, Faculty of Agricultural Sciences, University of Guilan, Iran گروه گیاهپزشکی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان Arash Zibaee آرش زیبایی arash.zibaee@guilan.ac.ir 10031947532846003665 10031947532846003665 Yes Department of Plant Protection, Faculty of Agricultural Sciences, University of Guilan, Iran گروه گیاهپزشکی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، ایران