Genetic Engineering and Biosafety Journal

fa همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس PVX در باکتری به منظور تولید حامل داروهای ضد سرطان Cloning and expression of PVX coat protein in bacterium in order to produce carrier of anticancer drugs مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها Microrganisms and Viruses پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">استفاده از ویروسهای گیاهی به عنوان حاملهای داروهای ضد سرطان در پزشکی روز به روز درحال افزایش است. تشخیص ویروسها با استفاده از آنتی بادیهای اختصاصی نیز اهمیت ویژه ای برای کنترل بیماریهای گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیبزمینی دارد. یکی از مهمترین ویروسهای سیب زمینی (PVX)  Potato X Potexvirus  با گستره جهانی و جزو اولین ویروسهای گیاهی مورد استفاده به عنوان حامل داروهای ضد سرطانی میباشد. در این تحقیق به منظور تولید پیکره های  PVX، ژن Coat protein (CP) آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش  RT-PCRبا استفاده از آغازگرهای اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر CP انجام گرفت. الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول bp 714 را تایید کرد. ژن CP و پلاسمید  pGBKT7 توسط آنزیمهای  BamHIو EcoRI برش داده شدند و پس از خالص سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pGBKT7 -CPPVX با الکتروپوراسیون به باکتری E. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتریهای حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک PCR و استخراج پلاسمید از آنها، توالی یابی درست بودن توالی ژن کلون شده را تایید کرد. در ادامه ژن CP در پلاسمید بیانیpET-21a به روش برش و لیگاسیون همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب به سویه BL21 باکتری E. coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن IPTG در محیط کشت باکتری تولید پروتئین CP از روی پلاسمید انجام و پروتئینهای باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین، بیان شدن CP را نشان داد. این پروتئین پس از خالصسازی میتواند به عنوان حامل داروهای ضد سرطان کاربرد داشته باشد.</div> <div style="text-align: justify;">The use of plant viruses as carriers of anti-cancer drugs in medicine is increasing day after day. One of the most important potato viruses is Potato X Potexvirus (PVX) which is globally expanded and is one of the first plant viruses used as a carrier of anticancer drugs. In this research, in order to produce PVX particles, its Coat protein (CP) gene was expressed. First, the RT-PCR reaction was performed for CP amplification using specific primers containing the endonuclease digestion sites. Electrophoresis of the PCR product on agarose gel confirmed the amplified fragment with a length of 714 bp. Then the CP gene and pGBKT7 plasmid were digested by BamHI and EcoRI enzymes and after purification, ligation was done between them. Recombinant plasmid pGBKT7-CPPVX was transferred to E. coli bacteria by electroporation. After selecting the bacteria containing the recombinant plasmid by PCR and extracting the plasmids from them, sequencing confirmed the correctness of the cloned gene sequence. Then, the CP gene was cloned into pET-21a expression plasmid by digestion and ligation method. The recombinant plasmid was transferred to BL21 strain of E. coli and cultured. By adding IPTG in the bacterial culture medium, CP protein was expressed from the plasmid and bacterial proteins were extracted. Protein electrophoresis showed the expression of CP. After purification, this protein can be used as a carrier of anti-cancer drugs.</div> PVX, Coat protein, بیان پروتئین, همسانه سازی, حامل دارو Cloning, Coat protein, drug carrier, PVX, protein expression 251 261 http://gebsj.ir/browse.php?a_code=A-10-104-10&slc_lang=fa&sid=1 Leila Pourhang لیلا پورهنگ leilapourhang95@yahoo.com 10031947532846005533 0009-0004-4208-9629 No Biotechnology Department, Faculty of Agriculture, Azarbaijan Shahid Madani University, Tabriz, Iran گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران Maghsoud Pazhouhandeh مقصود پژوهنده pazhouhandeh@gmail.com 10031947532846005534 10031947532846005534 Yes Biotechnology Department, Faculty of Agriculture, Azarbaijan Shahid Madani University, Tabriz, Iran گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران Akbar Shirzad اکبر شیرزاد ashirzad98@yahoo.com 10031947532846005535 10031947532846005535 No Department of plant protection, Faculty of Agriculture, Azarbaijan Shahid Madani University, Tabriz, Iran گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران