[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 7، شماره 2 - ( 10-1397 ) ::
جلد 7 شماره 2 صفحات 139-151 برگشت به فهرست نسخه ها
همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel6B در مخمر Pichia pastoris
فهیمه حیدری قره سو، نسرین مشتاقی، براتعلی مشکانی، سعید ملکزاده شفارودی
گروه بیوتکنولوژی و به‌نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، ایران ، nasrinmoshtagi@yahoo.com
چکیده:   (443 مشاهده)
آنزیم Cel6B از باکتری Thermobifidia fusca، یک CBHII متعلق به خانواده بی سلولازهاست که بسیار مقاوم به حرارت است. به علت میزان پایین تولید این آنزیم در میزبان اولیه نمی‌توان از این میزبان برای تولید آنزیم در مقیاس صنعتی استفاده نمود. به منظور بیان این آنزیم در مخمر، ژن سلوبیوهیدرولاز موجود در سازه PSZ143 با PCR تکثیر و به درون ناقل مخمری pPICZαA، همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب حاوی ژن cel6B، به باکتری Jm109 E. coli منتقل شده و باکتری‌های نوترکیب بر روی محیط کشت LB حاوی  µg/ml5/0 بلئومایسین، انتخاب شد. سازه نوترکیب خطی شده، با استفاده از الکتروپوریشن به مخمرPichia pastoris سویه‌های GS115 و KM71H منتقل شد. در نهایت بهترین غلظت متانول و بهترین روز بیان آنزیم نیز با روش DNS تعیین شد. نتایج نشان داد، بیشترین میزان فعالیت سلوبیوهیدرولاز در سویه‌های GS115 و KM71H و بر روی PC (پنبه اسید فسفریک شده) در دمای C°50 و به مدت 16 ساعت، به ترتیب 98/1 و U(mmol/min)/ml 475/0 است. نمونه مربوط به کلنی پر محصول سویه GS115 بر روی ژل SDS-PAGE بارگزاری و بیان آنزیم تأیید شد و سپس نتایج بهترین غلظت متانول و بهترین روز بیان آنزیم با همین سویه، در روز چهارم بعد از القاء با 3 درصد متانول (V/V) به‌دست آمد. عدم بهینه‌سازی کدون های ژن همسانه شده به پلاسمید مخمری باعث کاهش بیان و کاهش فعالیت سلوبیوهیدرولازی آن شد. مخمر پیشیا میزبان مناسبی برای بیان این آنزیم است که با بهینه‌سازی کدونهای توالی کدکننده این ژن، می‌توان بازدهی بیان را بهبود داد.
واژه‌های کلیدی: مخمر، سلوبیوهیدرولاز، فرآوری زیستی تلفیقی، ژن cel6B
متن کامل [PDF 1513 kb]   (195 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: ۱۳۹۷/۷/۲۲ | پذیرش: ۱۳۹۷/۱۱/۱۷ | انتشار: ۱۳۹۷/۱۱/۲۶
ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Heidari-Gharehsoo F, Moshtaghi N, Meshkani B, Malekzade-Shafarudi S. Cloning and Expression of cel6B Cellobiohydrolase gene in Pichia pastoris. Genetic Engineering and Biosafety Journal. 2018; 7 (2) :139-151
URL: http://gebsj.ir/article-1-265-fa.html

حیدری قره سو فهیمه، مشتاقی نسرین، مشکانی براتعلی، ملکزاده شفارودی سعید. همسانه سازی و بیان ژن سلوبیوهیدرولاز cel6B در مخمر Pichia pastoris. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1397; 7 (2) :139-151

URL: http://gebsj.ir/article-1-265-fa.html



دوره 7، شماره 2 - ( 10-1397 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دوفصل نامه علمی-پژوهشی مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی Genetic Engineering and Biosafety Journal
Persian site map - English site map - Created in 0.07 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 4006