[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 8، شماره 2 - ( 8-1398 ) ::
جلد 8 شماره 2 صفحات 121-131 برگشت به فهرست نسخه ها
همسانه سازی و بیان هترولوگ لاکاز در Pichia pastoris و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی لاکاز نوترکیب
الهام سلیمانی، قربانعلی نعمت زاده*، روحا کسری کرمانشاهی، سوسانا رودریگز کوتو
پژوهشکده ژنتیک و زیست‌فناوری کشاورزی طبرستان، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری ، Gh.nematzadeh@gmail.com
چکیده:   (890 مشاهده)
لاکازها آنزیم­هایی حاوی مس می­باشند که اکسیداسیون ترکیبات آروماتیک و غیرآروماتیک را از طریق احیای مولکول اکسیژن به آب کاتالیز می­کنند . همچنین به دلیل قابلیت اکسیداسیون طیف وسیعی از ترکیبات فنلی کاربرد وسیعی در صنعت دارند. در این مطالعه توالی نوکلئوتیدی ژن لاکاز بر اساس ترجیح کدونی میزبان مخمری Pichia pastoris GS115 بهینه شد، سپس توسط شرکت اینویتروژن سنتز و در حامل بیانی pPICZ alpha A همسانه سازی شد و تحت پیشبر AOX1 به مخمر پیکیا پاستوریس به روش الکتروپوریشن منتقل شد. به منظور تعیین شرایط بهینه بیش بیان آنزیم، در سطوح مختلفی از دما، غلظت مس و متانول القای بیان صورت گرفت و فعالیت آنزیم در هریک از سطوح ارزیابی شد. بیش بیان آنزیم در غلظت 4/0 میلی­ مولار مس و 8/0 درصد متانول و دمای 25 درجه سانتی­گراد به دست ­آمد. بیش  بیان ترشحی لاکاز در شرایط بهینه  U/L 9600 به دست­آمد. پس از بررسی کیفی و کمی آنزیم برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم تعیین شد. دما و pH بهینه لاکاز نوترکیب به ترتیب40 درجه سانتی­گراد و 3 تعیین شد. بررسی پایداری دمایی و pH لاکاز نشان داد که این آنزیم پایداری بالایی در برابر حرارت داشته و قادر به فعالیت در طیف وسیعی از pH می­باشد. بررسی خصوصیات کینتیکی آنزیم با استفاده از سوبسترای ABTS، mM ۰۸۹Km= تعیین شد. نتایج این تحقیق نشان داد که مخمر پیکیا پاستوریس می­تواند کاندیدای مناسبی برای بیان لاکاز نوترکیب به منظور استفاده در صنایع متعدد جهت پاکسازی پساب، بیوسنسور و سایر کاربردها باشد.
واژه‌های کلیدی: لاکاز، پیکیا پاستوریس، بیان هترولوگ، زیست‌پالایی، همسانه سازی
متن کامل [PDF 898 kb]   (151 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: 1398/4/19 | پذیرش: 1398/6/4 | انتشار: 1398/8/20
ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Soleimani E, Nematzadeh G, Kasra kermanshahi R, Rodriguez-Couto S. Cloning and heterologous expression of Laccase in Pichia pastoris and determination of some biochemical properties. Genetic Engineering and Biosafety Journal. 2019; 8 (2) :121-131
URL: http://gebsj.ir/article-1-309-fa.html

سلیمانی الهام، نعمت زاده قربانعلی، کسری کرمانشاهی روحا، رودریگز کوتو سوسانا. همسانه سازی و بیان هترولوگ لاکاز در Pichia pastoris و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی لاکاز نوترکیب. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1398; 8 (2) :121-131

URL: http://gebsj.ir/article-1-309-fa.html



دوره 8، شماره 2 - ( 8-1398 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دوفصل نامه علمی-پژوهشی مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی Genetic Engineering and Biosafety Journal
Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 32 queries by YEKTAWEB 4162