گروه پاتوبیولوژی دانشکده دامپزشکی دانشگاه شهید باهنر کرمان، ایران. ، golchin@uk.ac.ir
چکیده: (23 مشاهده)
کلیباسیلوز ناشی از Escherichia coli سروگروهO2 یکی از بیماریهای مهم باکتریایی در صنعت طیور است که میتواند خسارات اقتصادی قابل توجهی ایجاد کند. افزایش مقاومت آنتیبیوتیکی در سویههای بیماریزا، ضرورت استفاده از راهکارهای جایگزین از جمله طراحی واکسنها و سویههای تخفیف حدتیافته را برجسته کرده است. هدف از این مطالعه، طراحی و ساخت ناقل نوترکیب CRISPR/Cas9 حامل gRNA اختصاصی ژن entB در E. coli سروگروهO2 بهعنوان گامی اولیه در مسیر طراحی سویه تخفیف حدتیافته بود. در این مطالعه، gRNA اختصاصی علیه ژن entB با استفاده از پایگاه CHOPCHOP طراحی شد. الیگونوکلئوتیدهای رفت و برگشت مربوط به gRNA سنتز شده و پس از آنیلینگ (annealing)، درون پلاسمید pTargetF خطیشده با آنزیم BbsI، با استفاده از T4 DNA Ligase جایگذاری شدند. ناقل نوترکیب حاصل به سلولهای مستعد DH5α منتقل شد و ورود قطعه gRNA به داخل وکتور با استفاده از واکنش زنجیرهای پلیمراز و همچنین تعیین توالی تأیید گردید. نتایج نشان داد که توالی راهنمای طراحیشده با موفقیت در وکتور pTargetF کلون شده است. مشاهده باندهای مورد انتظار در آزمون PCR، صحت ساخت سازه نوترکیب را تأیید کرد. بر اساس یافتههای این پژوهش، ناقل نوترکیب طراحیشده میتواند بهعنوان ابزاری مقدماتی برای هدفگیری ژن entB و مطالعات بعدی در زمینه تخفیف حدت سویههای بیماریزای E. coli طیور مورد استفاده قرار گیرد.
امیری محدثه، گلچین مهدی، حاجی زاده عباس، فرزین حمیدرضا، جمشیدیان مجاور مجید. طراحی و ساخت ناقل نوترکیب pTargetF حمل کننده ی gRNA اختصاصی ژن entB برای سامانه CRISPR/Cas9 در E.coli سروگروه O2. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1404; 14 (2)
