[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
بخش‌های اصلی
صفحه اصلی::
اطلاعات نشریه::
آرشیو مجله و مقالات::
برای نویسندگان::
برای داوران::
ثبت نام و اشتراک::
تماس با ما::
تسهیلات پایگاه::
بایگانی مقالات زیر چاپ::
::
::
شماره‌های چاپ شده

فایل لیست داوران مقالات 

دوره سیزدهم سال 1403
شماره اول
شماره دوم

دوره دوازدهم سال 1402
شماره اول
شماره دوم

دوره یازدهم سال 1401
شماره اول
شماره دوم
دوره دهم سال 1400
شماره اول
شماره دوم
دوره نهم سال 1399
شماره اول
شماره دوم
دوره هشتم سال 1398
شماره اول
شماره دوم

دوره هفتم سال 1397
دوره ششم سال 1396
دوره پنجم سال 1395
دوره چهارم سال 1394
دوره سوم سال 1393
دوره دوم سال 1392
دوره اول سال 1391
..
راهنمای نگارش
..
جستجو در پایگاه

جستجوی پیشرفته
..
دریافت اطلاعات پایگاه
نشانی پست الکترونیک خود را برای دریافت اطلاعات و اخبار پایگاه، در کادر زیر وارد کنید.
..
:: دوره 12، شماره 2 - ( 9-1402 ) ::
جلد 12 شماره 2 صفحات 261-251 برگشت به فهرست نسخه ها
همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس PVX در باکتری به منظور تولید حامل داروهای ضد سرطان
لیلا پورهنگ ، مقصود پژوهنده* ، اکبر شیرزاد
گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران ، pazhouhandeh@gmail.com
چکیده:   (455 مشاهده)
استفاده از ویروسهای گیاهی به عنوان حاملهای داروهای ضد سرطان در پزشکی روز به روز درحال افزایش است. تشخیص ویروس­ها با استفاده از آنتی ­بادی­های اختصاصی نیز اهمیت ویژه ­ای برای کنترل بیماری­های گیاهی خصوصا در برنامه تولید بذر سیب­زمینی دارد. یکی از مهمترین ویروس­های سیب زمینی (PVX)  Potato X Potexvirus  با گستره جهانی و جزو اولین ویروسهای گیاهی مورد استفاده به عنوان حامل داروهای ضد سرطانی می­باشد. در این تحقیق به منظور تولید پیکره ­های  PVX، ژن Coat protein (CP) آن بصورت نوترکیب تولید گردید. ابتدا، واکنش  RT-PCRبا استفاده از آغازگر­های اختصاصی حاوی سایت برشی برای تکثیر CP انجام گرفت. الکتروفورز محصول PCR بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طول bp 714 را تایید کرد. ژن CP و پلاسمید  pGBKT7 توسط آنزیم­های  BamHIو EcoRI برش داده شدند و پس از خالص ­سازی لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. پلاسمید نوترکیب pGBKT7 -CPPVX با الکتروپوراسیون به باکتری E. coli منتقل و در آن تکثیر گردید. پس از گزینش باکتری­های حاوی پلاسمید نوترکیب به کمک PCR و استخراج پلاسمید از آنها، توالی­ یابی درست بودن توالی ژن کلون شده را تایید کرد. در ادامه ژن CP در پلاسمید بیانیpET-21a به روش برش و لیگاسیون همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب به سویه BL21 باکتری E. coli منتقل و کشت گردید. با اضافه کردن IPTG در محیط کشت باکتری تولید پروتئین CP از روی پلاسمید انجام و پروتئین­های باکتری استخراج شد. الکتروفورز پروتئین، بیان شدن CP را نشان داد. این پروتئین پس از خالص­سازی میتواند به عنوان حامل داروهای ضد سرطان کاربرد داشته باشد.
واژه‌های کلیدی: PVX، Coat protein، بیان پروتئین، همسانه سازی، حامل دارو
متن کامل [PDF 935 kb]   (145 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: 1402/6/15 | پذیرش: 1402/10/21 | انتشار: 1402/12/20
فهرست منابع
1. Abel, PP., Nelson, RS., De, B., Hoffmann, N., Rogers, SG., Fraley, RT., Beachy, RN. (1986). Delay of disease development in transgenic plants that express the tobacco mosaic virus coat protein gene. Science, 232, 738-743. [DOI:10.1126/science.3457472]
2. Abdel-Salam, AM., EI-Attar, AK., Gambley, CF. (2014). Production of polyclonal antisera to a recombinant coat protein of Potato viruas Y expressed in Escherrichia coli and its . application for immunodiagnosis. Int J Virol, 10, 1-16. [DOI:10.3923/ijv.2014.1.16]
3. Abou-Javad, Y., Sobh, H., Cordahi, N., Kawtharani, H., Nemer, G., Maxwell, DP., Nakhla, MK. (2004). Immunodiagnosis of prune dwarf virus using antiserum production to its recombinant coat protein. Journal of virological Methods, 121, 31-38. [DOI:10.1016/j.jviromet.2004.05.013]
4. Alhoot, MA., Wang, SM., Sekaran, SD. (2012). RNA interference mediated inhibition of dengue virus multiplication and entry in HepG2 cells. PLoS One, 7,34060. [DOI:10.1371/journal.pone.0034060]
5. Beuve, M., Sempé, L., Lemaire, O. (2007). A sensitive one-step real-time RT-PCR method for detecting Grapevine leafroll-associated virus 2 variants in grapevine. J Virol Methods, 141, 117-124. [DOI:10.1016/j.jviromet.2006.11.042]
6. Callaway, A., Giesman-Cookmeyer, D., Gillock, ET., Sit, TL., Lommel, SA. (2001). The multifunctional capsid proteins of plant RNA viruses. Annu. Rev. Phytopathol, 39, 419-460. [DOI:10.1146/annurev.phyto.39.1.419]
7. Carrington, JC., Kasschau, KD., Mahajan, SK., Schaad, MC. (1996). Cell-to-cell and long-distance transport of viruses in plants. Plant Physiol, 8,1669-1681. https://doi.org/10.1105/tpc.8.10.1669 [DOI:10.1105/tpc.8.10.1669 or https://doi.org/10.2307/3870221]
8. Cerovska, N., Moravec, T., Plchova, H. et al. (2010). Production of polyclonal antibodies to Potato virus X using recombinant coat protein. J Phytopathol, 158, 66-68. [DOI:10.1111/j.1439-0434.2009.01580.x]
9. Chen, CC., Chang, CA. (1998). Characterization of a potyvirus causing mild mosaic on tuberose. Plant Disease, 82, 45-49. [DOI:10.1094/PDIS.1998.82.1.45]
10. Chen, CC., Hsiang, T., Chiang, FL., Chang, CA. (2002). Molecular characterization of Tuberose mild mosaic virus and preparation of its antiserum to the coat protein expression in bacteria. Botanical Bulletin of Academia Science, 43, 13-20.
11. Demain, AL., Vaishnav, P. (2009). Production of recombinant proteins by microbes and higher organisms. Biotechnol Adv, 27, 297-306. [DOI:10.1016/j.biotechadv.2009.01.008]
12. Fajardo, TVM., Barros, DR., Nickel, O., et al. (2007). Expression of Grapevine leafroll-associated virus-3 coat protein gene in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies. Fitopatol. Bras, 32, 496-500. [DOI:10.1590/S0100-41582007000400008]
13. Fedorkin, ON., Solovyev, AG., Yelina, NE., Zamyatnin, AA., Zinovkin, RA., Makinen, K., Schiemann, J., Morozov, SY. (2001). Cell-to-cell movement of Potato virus X involves distinct functions of the coat protein. J Gen Virol, 82, 449-458. [DOI:10.1099/0022-1317-82-2-449]
14. Fischer, B., Sumer, I., Goodenough, P. (1993). Isolation, renaturation and formation of disulfide bonds of eukaryotic proteins expressed in Escherichia coli as inclusion bodies. Biotechnol Bioeng, 41, 3-13. [DOI:10.1002/bit.260410103]
15. Hasan-Sheikhi, P., Massumi, H., Zolala, J., Heydarnejad, J., Hosseinipour, A., Maddahian, M. (2020). Expression of the recombinant coat protein of Potato virus X in Escherichia coli. Journal of Agricultural Biotechnology, 11(4), 175-192.
16. Hefferon, KL., Khalilian, H., AbouHaidar, MG. (1997). Expression of the PVYo coat protein (CP) under the control of the PVX CP gene leader sequence: Protection under greenhouse and field conditions against PVYo and PVYN infection in three potato cultivars. Theoretical and Applied Genetics, 94, 287-292. [DOI:10.1007/s001220050412]
17. Huisman, MJ., Linthorst, HJM., Bol, JF., Cornelissen, BJC. (1988). The complete nucleotide sequence of potato virus X and its homologies at the amino acid level with various plus stranded RNA viruses. Journal of General Virology, 69, 1789-1798. [DOI:10.1099/0022-1317-69-8-1789]
18. Janknecht, R., Martynoff, G., Lou, J., et al. (1991). Rapid and efficient purification of native histidine-tagged protein expressed by recombinant vaccinia virus. PNAS, 88, 8972-8976. [DOI:10.1073/pnas.88.20.8972]
19. Jeevalatha, A., Kaundal, P,. Kumar, R., Raigond, B., Gupta, M., Kumar, A., Sharma, S., Sagar, V., Nagesh, M., Singh, BP. (2016). Analysis of the coat protein gene of Indian Potato virus X isolates for identification of strain groups and determination of the complete genome sequence of two isolates. Springer. [DOI:10.1007/s10658-016-0858-1]
20. Jellis, S. (1992). Multiple resistance to diseases and pests in potatoes, Cambridge. Plant Breeding International, 63, 51-58. [DOI:10.1007/978-94-017-0954-5_4]
21. Khan, S., Jan, AT., Mandal, B. et al. (2012). Immuno-diagnostics of cucumber mosaic virus using antisera developed against recombinant coat protein. Archives of Phytopathology and Plant Protection, 45, 561-59. [DOI:10.1080/03235408.2011.588043]
22. Koohapitagtam, M., Nualsri, C. (2013). Production of polyclonal antibodies specific to the recombinant coat protein of Blackeye cowpea mosaic virus and its use in disease detection. Kasetsart J (Natural Science), 47, 603-613.
23. Kutnjak, D., Silvestre, R., Cuellarb, W., Perezb, W., Mullerb, G., Ravnikara, QM., Kreuze, J. (2014). Complete genome sequences of new divergent potato virus X isolatesand discrimination between strains in a mixed infection using smallRNAs sequencing approach. Journal of ELSEVIER. [DOI:10.1016/j.virusres.2014.07.012]
24. Leshchiner, A., Minina, E., Rakitina, D., Vishnichenko, V., Solovyev, A., Morozo, S., et al. (2008). Oligomerization of the potato virus X 25-kD movement protein. Biochemistry (Mosc), 73, 50-55. [DOI:10.1134/S0006297908010070]
25. Makrides, SC. (1996). Strategies for achieving high-level expression of genes in Escherichia coli. Microbiol Rev, 60, 512-538. [DOI:10.1128/mr.60.3.512-538.1996]
26. Masoudi, N., Rouhibakhsh, A., Asareh, MH., Naderpour, M., Koolivand, D., (2018). Identification of dominant isolate of Potato virus S in Iran and heterologous expression of its coat protein. Genetic Engineering and Biosafety Journal, 7 (2), 153-162. Dor:20.1001.1.25885073.1397.7.2.5.6
27. Matthews, REF. (1993). Diagnoses of Plant Virus Diseases. CRC Press. Boca Raton, 374.
28. Prins, M., Laimer, M., Noris, E., Schubert, J., Wassenegger, M., Tepfer, M. (2008). Strategies for antiviral resistance in transgenic plants. Mol Plant Path, 9(1), 73-83. [DOI:10.1111/j.1364-3703.2007.00447.x]
29. Qiagen. (2003). The QIA expression istTM - A handbook for high-level expression and purification of 6xHis-tagged proteins. Qiagen, Hilden, Germany.
30. Rezaee, A., Soltani, A. (1996). Potato Farming. Mashhad, Jahad Daneshgahi Publication, Iran (In Persian).
31. Sadeghan, A., Shams-bakhsh, M., Yakhchali, B. (2013). Expression of Citrus tristeza virus coat protein gene in Escherichia coli. Prot, 2, 387-393.
32. Shamsadden-Saeed, F., Massumi, H., Moradi, S., Maddahian, M., Heydarnejad, J., Hosseini Pour, A., Varsani, A. (2014). Incidence and characterization of Potato virus V infections in Iran. Virus disease, 25, 78-84. [DOI:10.1007/s13337-013-0178-4]
33. Smith, KM. (1931). On the composite nature of certain potato virus diseases of the mosaic group as revealed by the use of plant indicators and selective method of transmission. 109, 251-267. [DOI:10.1098/rspb.1931.0080]
34. Soliman, AM., Barsoum, BN., Mohamed, GG., El-Attar, AK., Mazyad, HM. (2006). Expression of the coat protein gene of the Egyptian isolate of Potato virus X in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies against it. Arab J. Biotech, 9, 115-128.
35. Soliman, AM., Barsoum, BN., Mohamed, GG., Rezk, AA., Aboul-Ata, AE., Mazyad, HM. (2008). siRNA Silencing of PVX Coat Protein Gene Affects Accumulation of Viral RNA in Potato and Tobacco Plants. International Journal of Virology. 4(1). 14-25. [DOI:10.3923/ijv.2008.14.25]
36. Terpe, K. (2006). Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems. Appl Microbiol Biotechnol, 72, 22-211. [DOI:10.1007/s00253-006-0465-8]
37. Van Regenmortel, MHV. (1982). Serology and immunochemistry of Plant Viruses. Academic Press, INC. New York. [DOI:10.3109/08820138209050747]
38. Verchot-Lubicz, J. (2005). A new model for cell-to-cell transport of potexviruses. Molecular Plant Microbe Interaction, 18, 283-290. [DOI:10.1094/MPMI-18-0283]
39. Verchot-Lubicz, J., Ye, CM., Bamunusinghe, D. (2007). Molecular biology of Potexviruses: recent advances. J Gen Virol, 88, 1643-1655. [DOI:10.1099/vir.0.82667-0]
40. Yonghui, H. (2010). Transient expression of potato virus x coat protein gene in Nicotiana benthamiana Suranaree. Master of Science Biotechnology thesis. Suranaree University of Technology.
41. Yu, XQ., Wang, HY., Lan, YF. (2008). Complete genome sequence of a Chinese isolate of Potato virus X and analysis of genetic diversity. Phytopathol, 156, 346-351. [DOI:10.1111/j.1439-0434.2007.01365.x]
ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Pourhang L, Pazhouhandeh M, Shirzad A. Cloning and expression of PVX coat protein in bacterium in order to produce carrier of anticancer drugs. gebsj 2023; 12 (2) :251-261
URL: http://gebsj.ir/article-1-502-fa.html

پورهنگ لیلا، پژوهنده مقصود، شیرزاد اکبر. همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی ویروس PVX در باکتری به منظور تولید حامل داروهای ضد سرطان. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1402; 12 (2) :251-261

URL: http://gebsj.ir/article-1-502-fa.html



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 12، شماره 2 - ( 9-1402 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دوفصل نامه علمی-پژوهشی مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی Genetic Engineering and Biosafety Journal
Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 39 queries by YEKTAWEB 4700