|
استفاده از پلتفرم سوسپانسیون سلول‌های گیاهی BY-2 برای تولید آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز
|
رضا محمدزاده    ، مصطفی مطلبی* ، زهرا مقدسی جهرمی |
| گروه زیست‌فناوری مولکولی گیاهی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری، تهران ، motalebi@nigeb.ac.ir |
|
|
چکیده: (129 مشاهده) |
به دلیل افزایش تقاضا برای محصولات عاری از فرآورده‌های حیوانی، سلول‌های گیاهی به عنوان یک پلتفرم مناسب برای تولید پروتئین‌های نوترکیب مورد توجه می‌باشند. نگهداری ارزان، ساده بودن جداسازی و خالص‌سازی محصول تولید شده و کشت مستقل از شرایط آب و هوایی، کیفیت خاک، فصل‌ها، طول روز و وضع هوا از مزیتهای استفاده از سوسپانسیون‌های سلولی می‌باشد. در این تحقیق از سلول‌های گیاهی BY-2 استفاده شد که علاوه بر مزیتهای فوق سرعت تقسیم بالای سلولی از ویژگی‌های مهم سلول‌های BY-2 است. ابتدا به منظور بهینه‌سازی انتقال و بیان ژن در سلول‌های BY-2، ژن گزارشگر gus به این سلول‌ها منتقل شد. بیان این ژن منجر به فنوتیپ قابل سنجش می‌شود. برای اثبات حضور ژنgus در سلول‌های BY-2، قطعه bp521 مورد انتظار با استفاده از PCR مشاهده شد. جهت تایید بیشتر در سنجش بیوشیمیایی GUS در سلول‌های BY-2تراریخته، آبی شدن سلول‌ها مشاهده شد. جهت بیان آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز، ژن bgnI حاوی اینترون از جدایه قارچ T. virens در وکتور دوگانه pBI121GUS- همسانه‌سازی و سازه بدست آمده به سلول‌های BY-2 جهت بیان پروتئین منتقل شد. بررسی بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز در سلول‌های تراریخته، با استفاده از الگوی پروتئینی توسطSDS-PAGE انجام گرفته و بیان آنزیم مورد نظر در سلول‌هایBY-2 مورد تایید قرار گرفت. برای تعیین فعالیت آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز (BgnI) از روش دی نیترو سالسیلیک اسید (DNS)، جهت اندازه‌گیری مقدار قند‌های احیا شده حاصل از عمل این آنزیم استفاده شد. نتایج بدست آمده نشان داد که سلول‌های BY-2 تراریخته قادر به بیان آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز فعال که دارای فعالیت آنزیمی هستند می‌باشد.
|
|
| واژه‌های کلیدی: آنزیم بتا-1و3 گلوکاناز، پروتئین نوترکیب، ژن bgnI، سلول BY-2، گلوکان. |
|
|
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
مهندسی ژنتیک گیاهی
دریافت: 1402/3/29 | پذیرش: 1402/6/17 | انتشار: 1402/12/24
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
