دانشگاه بوعلی سینا همدان دانشکده کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی ، a.mirzaie@basu.ac.ir
چکیده: (6653 مشاهده)
کشاورزی مولکولی به تولید پروتئینهای دارویی و آنزیمهای صنعتی توسط گیاهان از طریق مهندسی ژنتیک اطلاق میشود. آنزیم T7RNA پلیمراز یکی از مهمترین آنزیمهاست که به طور وسیعی در زمینههای مختلف بیوتکنولوژی و زیستشناسی سلولی و مولکولی، از قبیل سنتز و مطالعه ساختار و عملکرد RNA ها در شرایط آزمایشگاهی استفاده می شود. RNAهای سنتز شده در شرایط آزمایشگاهی در هیبریداسیون، ریزآرایه، آزمایشات RNAiو RNAآنتی سنس کاربرد دارد. این آنزیم همچنین در سیستمهای بیانی وابسته به پیشبر و خاتمه دهنده T7 کاربرد فراوان دارد. آنزیم T7RNA پلیمراز یک آنزیم باکتریوفاژی بوده و فعالیت اصلی آن در سیتوپلاسم میباشد. تحقیق حاضر جهت همسانه سازی، انتقال ژن آنزیم T7RNAپلیمراز به هسته سلولهای یوکاریوتی و تولید آن در گیاه توتون انجام گرفت. آغازگرهای مناسب از روی توالی ژن T7RNA پلیمراز به همراه توالیهای مناسب برای آنزیمهای برشی، طراحی و ژن T7RNA پلیمراز مورد نظر پس از جداسازی در ناقل بیانیpCAMBIA1304 همسانهسازی شد. به منظور اطمینان از همسانهسازی، سازه تهیه شده با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و توالییابی بررسی شده و همردیفی آن در بانک اطلاعاتی اسیدهای نوکلئیک تأیید گردید. سپس، سازه نوترکیب به کمک سویه LB4404 آگروباکتریوم به گیاهان توتون منتقل و گیاهان تراریخته بر روی محیطهای کشت انتخابی حاوی آنتی بیوتیکهای هیگرومایسین و سفوتاکسیم، باززا شدند. حضور و بیان ژن T7RNA پلیمراز در گیاهان تراریخته با روشهای PCR وRT- PCR تأیید شد.
Nalbandi K, Mirzaie Asl A, Khodaei L, Khodakaramian G. Cloning and Transformation of Bacteriophage T7 RNA Polymerase in Tobacco. Genetic Engineering and Biosafety Journal 2017; 5 (2) :67-75 URL: http://gebsj.ir/article-1-147-fa.html
نعلبندی کبری، میرزایی اصل اصغر، خدایی لیلا، خداکرمیان غلام. همسانهسازی و انتقال آنزیم T7RNAپلیمراز باکتریوفاژ T7 به توتون. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1395; 5 (2) :67-75