[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 8، شماره 1 - ( 4-1398 ) ::
جلد 8 شماره 1 صفحات 62-51 برگشت به فهرست نسخه ها
همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی جدایه‌ ایرانی ویروس لکه برگی کلروتیک سیب (ACLSV) در E. coli
دانیال میرزایی، محمد حاجی زاده*، عبدالباسط عزیزی، داود کولیوند
گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان، سنندج، ایران ، m.hajizadeh@uok.ac.ir
چکیده:   (3010 مشاهده)
ویروس لکه ­برگی کلروتیک سیب (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) یکی از ویروس­های مهم درختان میوه دانه­ دار و هسته­ دار می­باشد که گسترش جهانی دارد. هدف از این مطالعه، ساخت سازه بیانی و سپس بیان ژن پروتئین پوششی (Coat Protein (CP)) ویروس لکه ­برگی کلروتیک سیب در باکتری Escherichia coli می­باشد. بیان پروتئین پوششی در سیستم پروکاریوتی، نیاز به خالص‌سازی ویروس از گیاه میزبان را که مستلزم وجود اولتراسانتریفوژ است، مرتفع می‌سازد. به منظور تولید پروتئین پوششی نوترکیب، جدایه SSa از میزبان سیب جداسازی و با آغازگرهای اختصاصیACLSV-MF وACLSV-MR ژن کامل پروتئین پوششی به طول 582 جفت باز تکثیر شد. ژن کامل CP به حامل همسانه‌سازی pTG19 متصل‌ و به باکتری E. coli سویه DH5α منتقل شد. باکتری‌های تراریخت شده با پلاسمید نوترکیب روی محیط کشت LB حاوی آمپی‌سیلین، X-Gal و IPTG غربال و به روش تجزیه قلیایی استخراج گردیدند. این ژن در پلاسمید استخراج شده با آنزیم‌های BamHI و  XhoIکه محل اثر آنها در آغازگرها قرار داده شده بودند، برش و به حامل بیان pET28a(+) که با همین دو آنزیم برش داده شده بودند، اتصال داده شد. pET28a (+) حاوی ژن CP ویروس در باکتری E. coli سویه BL21(DE3) ترانسفورم و سپس القاء بیان CP با اضافه نمودن IPTG در غلظت نهایی 1mM پس از چهار ساعت در الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید حاوی سدیم دودسیل سولفات (SDS-PAGE) بررسی شد. نتایج حاصل از SDS-PAGE حاکی از بیان پروتئین حدود 26 کیلودالتونی مربوط به ژن پروتئین پوششی ویروس مذکور بود. بیان این پروتئین می­تواند برای تولید آنتی­ بادی بر علیه ACLSV مورد استفاده قرار گیرد.
 
واژه‌های کلیدی: آنتی‌بادی، الکتروفورز عمودی، بیان، پروتئین نوترکیب، همسانه‌سازی
متن کامل [PDF 1026 kb]   (1606 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: مهندسی ژنتیک میکروارگانیسم ها و ویروسها
دریافت: 1398/2/12 | پذیرش: 1398/6/21 | انتشار: 1398/6/21
ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Mirzaei D, Hajizadeh M, Azizi A, Kolivand D. Cloning and expression of Iranian isolate of Apple chlorotic leaf spot virus coat protein gene in E. coli. Genetic Engineering and Biosafety Journal 2019; 8 (1) :51-62
URL: http://gebsj.ir/article-1-295-fa.html

میرزایی دانیال، حاجی زاده محمد، عزیزی عبدالباسط، کولیوند داود. همسانه سازی و بیان ژن پروتئین پوششی جدایه‌ ایرانی ویروس لکه برگی کلروتیک سیب (ACLSV) در E. coli. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی 1398; 8 (1) :62-51

URL: http://gebsj.ir/article-1-295-fa.html



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 8، شماره 1 - ( 4-1398 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دوفصل نامه علمی-پژوهشی مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی Genetic Engineering and Biosafety Journal
Persian site map - English site map - Created in 0.05 seconds with 30 queries by YEKTAWEB 4505