گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشکده تولید گیاهی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان، ایران ، Khalil1381@yahoo.com
چکیده: (3496 مشاهده)
یکی از آنزیمهای درگیر در تطبیق پذیری با شرایط مختلف محیطی، آنزیم بیوتین سولفوکساید ریداکتاز (BisC) است که علاوه بر توانایی تبدیل بیوتین سولفوکساید به بیوتین در شرایط اکسیداتیو، میتواند متیونین سولفوکساید را نیز به متیونین تبدیل کند. اسید آمینه متیونین چه بصورت آزاد و چه در زنجیره پروتئینی اهمیت بسیاری در فرایند سنتز پروتئین و فعالیت آن داراست. آنزیم بیوتین سولفوکساید ریداکتاز (BisC) برای فعال بودن وابسته به کوفاکتور باکتریایی MGDـBis میباشد. در این مطالعه به منظور تایید فعال بودن کوفاکتور باکتریایی MGDـBis روشی غیرمستقیم طراحی شد که در این روش از آنزیم باکتریایی بیوتین سولفوکساید (BisC) به عنوان ژن گزارشگر استفاده شد. در این راستا سازه ژنی BisCـpJet ساخته شد و شوک حرارتی به باکتری E.coli استرین Mach1 منتقل شد. کلونهای تشکیل شده در محیط LB جامد با آنتی بیوتیک آمپیسیلین 200 µg/ml انتخاب شدند و سپس واکنش PCR روی آنها صورت گرفت. پس از تایید نتایج توالی یابی کلونهای مثبت، قطعه مورد نظر جدا و به ناقل بیانی pETDuet انتقال داده شد. کلونهای حاوی ژن به باکتری میزبان Rossetta منتقل شدند. فرابیان آنزیم BisC بر روی ژل PAGEـSDS مورد بررسی قرار گرفت و نیز فعالیت این آنزیم بصورت باند بیرنگ بر اثر اکسید شدن متیل وایولوژن روی ژل Native مشاهده شد که نشان دهنده حضور فعال کوفاکتور MGDـBis بود.
Kabir K, Zaynali Nezhad K, Weber A, Ramezanpour S S, Eisenhut M. Establishment of molybdeum cofactor detection system in Escherichia coli. gebsj 2020; 9 (1) :11-18 URL: http://gebsj.ir/article-1-342-fa.html
کبیر کیانا، زینلی نژاد خلیل، وبر آندریاس، رمضانپور سیده ساناز، آیسنهوت ماریون. ایجاد سیستم شناسایی وجود کوفاکتور مولیبدئوم در باکتری Escherichia coli. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1399; 9 (1) :11-18
