گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، زنجان، ایران ، Koolivand@znu.sc.ir
چکیده: (1057 مشاهده)
یکی از ویروسهای مهم آلوده‌کننده درختان میوه، ویروس لکه‌برگی کلروتیک سیب (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSVاست. تهیه آنتی بادی و طراحی کیت الایزا و بیوسنسورها یکی از راهبردهای مفید در تشخیص زود هنگام عوامل بیماریزا در نمونه های با تعداد زیاد است. در همین راستا، تحقیق حاضر با هدف تولید آنتی‌بادی چندهمسانه ای نوترکیب و طراحی کیت الایزا جهت ردیابی سریع ویروس لکه برگی کلروتیک سیب با استفاده از بیان در سیستم پروکاریوتی انجام شد. ابتدا، سازه pTG19-ACLSV-CP بهباکتریEscherichiacoli سویهDH5α منتقل و پس از تکثیر و استخراج پلاسمید نوترکیب، ژن پروتئین پوششی با استفاده از آنزیمهای برشی خارج و درون پلاسمید بیانpET28(a) همسانه‌سازی گردید. سازه بیان pET28-ACLSV-CP ساخته شده به‌منظور بیان پروتئین، به باکتریE. coli سویه BL21(DE3) منتقل شد. پس از بهینه‌سازی، بیان و استخراج پروتئین پوششی، نوار پروتئینی با اندازه تقریبی 27کیلودالتون چهار ساعت بعد از القاء مشاهده شد. سپس، پروتئین بیان شده به روش طبیعی با ستون Ni-NTA Agarose، خالص‌سازی شد. پروتئین خالص شده، به‌عنوان آنتی‌ژن به خرگوش ماده نژاد نیوزیلندی طی چهار مرحله تزریق شد. ایمنوگلوبولینها با استفاده از کیت تخلیص IgG مبتنی بر پروتئین A از سرم خون به دست آمده از خرگوشهای ایمن شده تخلیص شدند. کارایی ایمنوگلوبولین‌های خالص شده، نشان داد که کاربرد غلظت 1:1000 آنتی‌بادی نوترکیب تهیه شده و نشاندار برای ردیابی آنتی‌ژن‌های موردنظر مناسب هستند. نتایج آزمونهای مختلف نشان داد، آنتی‌بادی تولید شده جهت ردیابی ویروس لکه برگی کلروتیک سیب دارای اختصاصیت و کارایی مناسب است، و از این آنتی بادیها میتوان برای شناسایی این ویروس به منظور غربال درختان و یا نمونههای مشکوک استفاده کرد.
Afrashtehg M, Koolivand D, Hajizadeh M, Masoudi N. Preparation of recombinant polyclonal antibody against Apple chlorotic leaf spot virus and its efficiency. gebsj 2023; 12 (1) :68-80 URL: http://gebsj.ir/article-1-454-fa.html
افراشته مریم، کولیوند داود، حاجی زاده محمد، مسعودی ناهید. تهیه آنتی‌بادی چند همسانه‌ای نوترکیب علیه ویروس لکه‌برگی کلروتیک سیب و بررسی کارایی آن. مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1402; 12 (1) :68-80
