دانشگاه شهید مدنی آذربایجان ، tarinejad@azaruniv.ac.ir
چکیده: (4764 مشاهده)
مخمر Saccharomyces cerevisiae دارای 20 ژن کدکننده پروتئینهای انتقالدهنده هگزوز است که شامل HXT1-HXT17، GAL2، SNF3 و RGT2 میباشد. دو ژن SNF3 و RGT2به عنوان حسگر گلوکز عمل کرده و ژنهایHXT1-HXT17در انتقال مستقیم گلوکز نقش دارند. پژوهشگران ثابت کردند که با افزایش میزان بیان این ژنها سرعت تخمیر الکلی افزایش و در نتیجه آن میزان تولید اتانول افزایش مییابد.هدفاینمطالعهشناساییوجداسازیژن RGT2یا Restores Glucose Transport2 ازژنوم مخمر S. cerevisiaeاز طریق PCRوهمسانهسازیآندرپلاسمیددارایپیشبربیانیمناسببهمنظورپایهایبرایطراحیپلاسمیدبیانی و در نهایتمخمرنوترکیببود. در این تحقیق پس از تهیه آغازگرهای اختصاصی، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر شد و واکنش لیگاسیون بین قطعه تکثیر یافته و پلاسمید pGEM-T انجام و کلونیهای ترانسفورم شده از طریق سیستم گزینش آبی- سفید شناسایی شدند و در نهایت برای تایید نهایی قطعات همسانه شده، پلاسمیدهای نوترکیب به توالییابی فرستاده شدند. بررسی نرمافزاری نشان داد که این ژن پروتئینی با وزن مولکولی173/83 کیلودالتون را کد کرده و دارای 763 اسیدآمینه بوده و نقطه ایزوالکتریک آن 68/5 میباشد. در ادامه، ژن RGT2از طریق محلهای برش آنزیمی PstI و NcoI در پلاسمید pGBKT7 همسانهسازی شد. توالی پروتئینی بدست آمده شباهت زیادی با RGT2p سویههای دیگر S. cerevisiae موجود در NCBI از جمله سویه P301 (100 درصد تشابه) نشان داده و بررسیهای فیلوژنتیکی با استفاده از سایر ژنهای خانواده انتقالدهندههای هگزوز نشان داد که RGT2 بیشترین ارتباط و شباهت را با SNF3دارد. با جداسازی و همسانه سازی و تعیین ویژگی و در نهایت انتقال این ژن به مخمر میتوان میزان تولید اتانول را طی تخمیر الکلی افزایش داد.
Azizi S, Tarinejad A. Cloning and investigation of RGT2 gene charecteristics from an Iranian strain of Saccharomyces cerevisiae. gebsj 2015; 4 (1) :11-24 URL: http://gebsj.ir/article-1-53-fa.html
عزیزی سولماز، تاری نژاد علیرضا. همسانهسازی و بررسی ویژگیهای ژن RGT2 از سویه ایرانی مخمر نان . مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی. 1394; 4 (1) :11-24